α1-酸性糖蛋白（AGP）是一種血液中的52千道爾頓的絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin），它保護組織免受炎癥細胞的酶，特別是彈性蛋白酶的傷害。在某些急性期炎癥反應中，AGP的水平會升高，以限制活化的中性粒細胞顆粒體及其彈性蛋白酶造成的損害。AGP的疾病包括AGP缺乏癥，這是一種遺傳性疾病，可能導致炎癥期間嚴重的組織破壞。在嚴重的情況下，這可能導致肺氣腫和肝硬化。AGP的遺傳變異確實會發(fā)生。

α1-酸性糖蛋白（AGP）檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），用于測量雞生物液體中的AGP。

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α1-酸性糖蛋白(雞)ELISA試劑盒，96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定的原理在圖1中表示。在這種測定中，樣品中的α1-酸性糖蛋白（AGP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗AGP抗體發(fā)生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗AGP抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的AGP形成復合物。經過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定免疫吸附劑上結合的酶。結合的酶量與測試樣品中AGP的濃度直接相關；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中AGP濃度的量度。測試樣品中AGP的量可以從標準品構建的標準曲線中插值得到，并根據樣品稀釋進行校正。

試劑（足夠96次測定的數量）

1. 稀釋液濃縮液（運行緩沖液）

一瓶含有50毫升5倍濃縮稀釋液的運行緩沖液。

2. 洗滌液濃縮液

一瓶含有50毫升20倍濃縮的洗滌液。

3. 酶-抗體結合物100倍

一瓶含有150微升親和純化的抗雞α1-酸性糖蛋白（AGP）抗體，與辣根過氧化物酶結合，并在穩(wěn)定緩沖液中。

4. 顯色底物溶液

一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化氫，在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

5. 終止液

一瓶含有12毫升0.3M硫酸。

警告：避免與皮膚接觸。

6. 抗雞AGP ELISA微孔板

十二個可移動的八（8）孔微孔條，在孔架中。每個孔都涂有親和純化的抗雞AGP。

7. 雞AGP校準品

一瓶含有凍干的雞AGP校準品。

試劑準備

1. 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

2. 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。當儲存溫度較低時，濃縮液中出現晶體并不罕見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

3. 酶-抗體結合物

通過向每個微孔板測試條添加10微升酶-抗體結合物至990微升1倍稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

4. 顯色底物溶液

按供應狀態(tài)直接使用。

5. 終止液

按供應狀態(tài)直接使用。

6. 抗雞AGP ELISA微孔板

按供應狀態(tài)直接使用。揭開微孔板袋封口，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封。

7. 雞AGP校準品

雞AGP校準品應分裝并冷凍保存。校準品現在的濃度為5.19微克/毫升。雞AGP標準品需要在立即使用前準備（見下表）。每步之間充分混合。避免起泡。

最終反應混合物的穩(wěn)定性：

在加入終止液后，最終反應混合物的吸光度可在長達2小時內進行測量。然而，良好的實驗室操作規(guī)范要求盡快進行測量。

結果：

1. 從每個樣品的測試值中減去平均背景值。

2. 使用標準觀察到的結果構建標準曲線。適當的曲線擬合是四參數邏輯曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子，以得到原始樣品中AGP的濃度。

程序的局限性：

1. 當完全理解了說明書中的信息，并遵循良好的實驗室操作規(guī)范時，將獲得可靠和可重復的結果。

2. 可能影響測定性能的因素包括儀器的正確功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質量、試劑和樣品移液的準確性、洗滌技術、孵育時間或溫度。

3. 不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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