全人類(lèi)IgD檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）用于測(cè)量人血清和血漿樣本中的IgD。僅供研究使用。不是用于診斷程序

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷(xiāo)產(chǎn)品IgD ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgD ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的原理如圖1所示。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，樣本中的IgD與已經(jīng)吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgD抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗IgD抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgD形成復(fù)合物。再經(jīng)過(guò)一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)檢測(cè)免疫吸附劑上結(jié)合的酶。結(jié)合酶的量與測(cè)試樣本中IgD的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣本中IgD濃度的量度。可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線插值計(jì)算測(cè)試樣本中的IgD量，并根據(jù)樣本稀釋進(jìn)行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?L至1000 ?L）用于制作和分發(fā)稀釋液

試管

噴霧瓶或微孔板洗滌/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀數(shù)器

用于準(zhǔn)備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計(jì)時(shí)器

抗凝劑（用于血漿樣本）

離心機(jī)

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)被視為潛在危險(xiǎn)。

在處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣本出現(xiàn)凝血、嚴(yán)重溶血、脂血或樣本完整性受到關(guān)注，應(yīng)做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

下面列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件是作為一般指導(dǎo)方針。

尚未評(píng)估樣本的穩(wěn)定性。

血清樣本：應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。通過(guò)離心分離血清和細(xì)胞。移除血清并立即進(jìn)行檢測(cè)或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

血漿樣本：應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行檢測(cè)或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

已知干擾物質(zhì)：高于0.1%濃度的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋?zhuān)?份緩沖液濃縮液，4份dH2O）。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋?zhuān)?份緩沖液濃縮液，19份dH2O）。當(dāng)儲(chǔ)存溫度較低時(shí)，濃縮液中可能出現(xiàn)結(jié)晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結(jié)晶。

酶-抗體結(jié)合物 - 通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條添加10 ?L酶-抗體結(jié)合物至990 ?L的1X稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋?zhuān)⒈芄狻＞鶆蚧旌希p柔。避免起泡。

預(yù)涂層ELISA微孔板 - 按提供的狀態(tài)使用。揭開(kāi)箔袋，從袋中取出板。移除在檢測(cè)中不會(huì)使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

人IgD校準(zhǔn)物 - 根據(jù)批次特定的分析證書(shū)準(zhǔn)備。

檢測(cè)程序

所有樣本和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以雙份進(jìn)行檢測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)品和樣本應(yīng)盡快裝入ELISA孔中，以避免OD讀數(shù)變化。使用多通道移液管可以減少這種情況的發(fā)生。分別移液100 μL： 0標(biāo)準(zhǔn)（0.0 ng/mL）雙份 1標(biāo)準(zhǔn)（6.25 ng/mL）雙份 2標(biāo)準(zhǔn)（12.50 ng/mL）雙份 3標(biāo)準(zhǔn)（25 ng/mL）雙份 4標(biāo)準(zhǔn)（50 ng/mL）雙份 5標(biāo)準(zhǔn)（100 ng/mL）雙份 6標(biāo)準(zhǔn)（200 ng/mL）雙份 7標(biāo)準(zhǔn)（400 ng/mL）雙份

分別移液100 μL樣本（雙份）至預(yù)指定孔中。

在室溫下孵育微孔板六十（60 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋并保持水平。

孵育后，抽吸孔內(nèi)內(nèi)容物。

用適當(dāng)稀釋的洗滌液完全填滿每個(gè)孔并抽吸。重復(fù)三次，總共四次洗滌。如果手動(dòng)洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，倒置板然后傾倒/搖晃內(nèi)容物至廢液容器。隨后用吸水紙尖銳擊打孔以去除殘留緩沖液。重復(fù)三次，總共四次洗滌。

向每個(gè)孔中分別移液100 μL適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物。在室溫下孵育十（10 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋覆蓋，避光并保持水平。

如步驟5和6所述洗滌和吸干孔。

向每個(gè)孔中分別移液100 μL TMB底物溶液。

在暗處室溫下精確孵育十（10）分鐘。

十分鐘后，向每個(gè)孔中加入100 μL終止液。

在三十分鐘內(nèi)測(cè)定每個(gè)孔內(nèi)內(nèi)容物的吸光度（450 nm）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板讀數(shù)器。

ALPCO產(chǎn)品種類(lèi)多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

作為ALPCO在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。