該犬總IgE檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于檢測犬血清或血漿中IgE的測定。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品IgE（犬）ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgE（犬）ELISA檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的原理在圖1中表示。在這個實驗中，樣本中的IgE與已經吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗體發(fā)生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗IgE抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的IgE形成復合物。再經過一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來檢測結合的酶。結合酶的量與測試樣本中IgE的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgE濃度的量度。測試樣本中的IgE量可以通過從標準品構建的標準曲線進行插值，并根據樣本稀釋進行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?l至100 ?l）用于制作和分發(fā)稀釋液

試管

微孔板洗滌/抽吸器或噴霧瓶

蒸餾水或去離子水

微孔板讀數器

用于準備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計時器

樣本收集用的離心機

血漿樣本收集用的抗凝劑

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險物品。在處理和處置時遵循通用預防措施。如果血液樣本出現凝血、嚴重溶血、脂血，或樣本的完整性受到關注，應做記錄并謹慎解釋結果。下面列出的樣本收集和儲存條件是作為一般指導方針。樣本的穩(wěn)定性尚未評估。

血清樣本 - 應通過靜脈穿刺收集血液。血液凝固后通過離心分離血清。移除血清并立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

血漿樣本 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

已知干擾物質 - 疊氮化物和硫柳汞在高于0.1%的濃度下會抑制酶反應。

樣本稀釋

該檢測要求在使用前對每個測試樣本進行稀釋。每次進行檢測時，所有樣本都應以雙份進行檢測。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋比例應基于未知樣本的預期濃度，以便稀釋后的樣本落在標準曲線的動態(tài)范圍內。如果不確定樣本水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣本進行連續(xù)稀釋。

血清和血漿樣本 - 推薦的起始稀釋比例為1:2,000。要準備1:2,000的樣本稀釋液，將5 ?L的樣本轉移到495 ?L的1X稀釋液中。這會產生1:100的稀釋液。接下來，將1:100的稀釋液通過轉移20 ?L到380 ?L的1X稀釋液中進行稀釋。這會產生1:2,000的稀釋液。在每個階段徹底混合。

試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）。當儲存溫度較低時，濃縮液中可能出現結晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結晶。

酶-抗體結合物 - 通過向每個微孔板測試條添加10?L酶-抗體結合物至990?L的1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

預涂層ELISA微孔板 - 即開即用。揭開箔袋，從袋中取出板。移除并放回所有未使用的條和孔至袋中，并重新密封，連同干燥劑。

狗IgE校準物 - 根據批次特定的分析證書準備。

結果計算

從所有測試值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度）。

對每個標準的平均讀數進行平均，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據構建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合，但擬合數據的精確度會較低。

從標準曲線中插值測試樣本值。校正稀釋因子，以得出原始樣本中的IgE濃度。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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