泛素是一種高度保守的調(diào)節(jié)蛋白，在所有真核組織中都有表達(dá)。最初，這種蛋白質(zhì)被稱(chēng)為：泛在免疫造血多肽。其功能是通過(guò)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）標(biāo)記蛋白質(zhì)進(jìn)行降解。

艾美捷UBQ11|泛素(親和純化)：

貨號(hào)：AS08-307A

免疫原：重組擬南芥泛素（ubq11），帶有N端His標(biāo)簽；TAIR編號(hào)：At4g05050

宿主：兔子

克隆性：多克隆

純度：免疫原親和純化的血清，溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）中。

形式：凍干

數(shù)量：50 ?g

復(fù)溶：使用前，每管加入20 ?l無(wú)菌水復(fù)溶。

儲(chǔ)存：凍干品/復(fù)溶后儲(chǔ)存于-20°C；復(fù)溶后請(qǐng)分裝保存，避免反復(fù)凍融。打開(kāi)前請(qǐng)短暫離心管子，以避免因物質(zhì)粘附在管蓋或管壁上而導(dǎo)致的損失。

測(cè)試應(yīng)用：西方印跡（WB）

推薦稀釋度：1:10,000（WB）

預(yù)期 | 表觀(guān)分子量：8.5 kDa

確認(rèn)的反應(yīng)性：擬南芥、大麥、窄葉豆、蘋(píng)果、本氏煙、水稻、豌豆、馬鈴薯、玉米、葡萄

預(yù)測(cè)的反應(yīng)性：短柄草、甘藍(lán)型油菜、獨(dú)行菜、異種曲霉、克萊門(mén)氏橘、甜橙、羅布斯塔咖啡、大花蕙蘭、巨桉、紅花油茶、大豆、野生大豆、紅薯、苜蓿、稻瘟菌、煙草、菜豆、楊樹(shù)、油桃、梨、蓖麻、黑種草、高粱、小麥、可可、葡萄

應(yīng)用舉例：

圖：從3周齡的馬鈴薯（1）、1周齡的窄葉豆（2）、豌豆（3）、玉米（4）和大麥（5）葉片中提取10 ?g可溶性蛋白。提取緩沖液包含50 mM HEPES-KOH（pH 7.5）、330 mM山梨醇、2 mM EDTA、1 mM MgCl?、5 mM抗壞血酸和0.05%牛血清白蛋白。所有樣品均與樣品緩沖液混合，在70°C下變性5分鐘，并在10% Tricine-SDS-PAGE上分離。蛋白質(zhì)通過(guò)半干法轉(zhuǎn)印至Hybond?-PVDF膜（Amersham Life Science），轉(zhuǎn)印時(shí)間為30分鐘，使用標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)印緩沖液并添加20%甲醇（Bio-Rad）。轉(zhuǎn)印完成后，使用1%龐塞奧S染色檢查蛋白質(zhì)是否成功轉(zhuǎn)印至膜上，隨后進(jìn)行封閉步驟。膜在室溫下用封閉緩沖液（5%脫脂奶粉，1xPBS，0.1% Tween）孵育60分鐘，期間不斷攪拌。膜在室溫下用一抗（稀釋度1:5000）孵育，期間不斷攪拌。棄去抗體溶液后，膜用PBS-T快速?zèng)_洗兩次，隨后在室溫下用PBS-T洗滌一次15分鐘，三次5分鐘，期間不斷攪拌。膜在室溫下用二抗（山羊抗兔IgG，AS09 602，Agrisera）孵育1小時(shí)，稀釋度為1:50,000，期間不斷攪拌。膜用上述方法洗滌后，用Clarity Western ECL底物和ChemiDoc檢測(cè)系統(tǒng)（Bio-Rad）顯色5分鐘。

UBQ11|泛素(親和純化)文獻(xiàn)參考：

Li et al. (2024). Stress granules sequester autophagy proteins to facilitate plant recovery from heat stress. Nat Commun . 2024 Dec 30;15(1):10910. doi: 10.1038/s41467-024-55292-w.

Xie et al. (2024). Proteasome resides in and dismantles plant heat stress granules constitutively. Mol Cell. 2024 Sep 5;84(17):3320-3335.e7. doi: 10.1016/j.molcel.2024.07.033.

Jeran et al. (2021) The PUB4 E3 Ubiquitin Ligase Is Responsible for the Variegated Phenotype Observed upon Alteration of Chloroplast Protein Homeostasis in Arabidopsis Cotyledons. Genes (Basel). 2021 Sep 6;12(9):1387. doi: 10.3390/genes12091387. PMID: 34573369; PMCID: PMC8464772.

Filippi et al. (2019). Caspase-3-like activity and proteasome degradation in grapevine suspension cell cultures undergoing silver-induced programmed cell death. J Plant Physiol. 2019 Feb;233:42-51. doi: 10.1016/j.jplph.2018.12.003.

Krasuska et al. (2016). Nitric oxide-polyamines cross-talk during dormancy release and germination of apple embryos. Nitric Oxide. 2016 Nov 23. pii: S1089-8603(16)30178-1. doi: 10.1016/j.niox.2016.11.003. [Epub ahead of print].