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AGO1|Argonaute 1:植物基因調(diào)控與免疫反應(yīng)的核心工具

發(fā)布者:艾美捷科技    發(fā)布時(shí)間:2025-01-20     
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AGO1屬于一組精氨酸蛋白,是RNA砧骨沉默復(fù)合物(RISC)的催化成分。這種蛋白質(zhì)復(fù)合物負(fù)責(zé)基因沉默(RNAi)。

 

艾美捷AGO1|Argonaute 1

貨號(hào):AS09-527

免疫原:與KLH偶聯(lián)的擬南芥AGO1(O04379,At1g48410)的N端肽段。

宿主:兔子

克隆性:多克隆

純度:免疫原親和純化的血清,溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)中。

形式:凍干

數(shù)量:50 ?g

復(fù)溶:復(fù)溶時(shí)加入50 ?l無菌水。

儲(chǔ)存:凍干品/復(fù)溶后儲(chǔ)存于-20°C;復(fù)溶后請(qǐng)分裝保存,避免反復(fù)凍融。打開前請(qǐng)短暫離心管子,以避免因物質(zhì)粘附在管蓋或管壁上而導(dǎo)致的損失。

測(cè)試應(yīng)用:染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)、免疫熒光(IF)、免疫定位(IL)、小RNA免疫沉淀測(cè)序(small-RNA-IP-Seq)、西方印跡(WB)

推薦稀釋度:2 ?g(ChIP),1:200(IF、IL、small-RNA-IP-Seq),1:5000-1:10,000(WB)

預(yù)期 | 表觀分子量:116.4 | 130 kDa

確認(rèn)的反應(yīng)性:擬南芥、風(fēng)信子、本氏煙

預(yù)測(cè)的反應(yīng)性:白菜型油菜、獨(dú)行菜、黃瓜、大豆、蘋果、豌豆、蓖麻、番茄、馬鈴薯、葡萄

未反應(yīng)的:萊茵衣藻、苜蓿、鼠尾草屬植物、菠菜、水稻、菜豆、小麥、玉米

哺乳動(dòng)物

 

應(yīng)用舉例:

AGO1|Argonaute 1

圖:80 ?g擬南芥可溶性全細(xì)胞提取物(提取緩沖液為20 mM Tris pH 7.5、5 mM MgCl?、2.5 mM DTT、300 mM NaCl、0.1% NP-40、1%蛋白酶體抑制劑MG132)在6% SDS-PAGE上分離,并轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜,轉(zhuǎn)印時(shí)間為1小時(shí)。膜在TBS-TT(含0.25% Tween20和0.1% Triton-X)中用5%脫脂奶粉封閉1小時(shí),隨后用抗AGO1抗體(1:10,000,1小時(shí))和二抗(山羊抗兔IgG,辣根過氧化物酶偶聯(lián),1:10,000,1小時(shí))孵育。抗體孵育后用TBS-TT洗滌。所有步驟均在室溫下進(jìn)行,期間不斷攪拌。膜用ECL-PLUS顯色試劑顯色5分鐘,按照制造商的說明操作。曝光時(shí)間為5秒。

羅氏蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA)也可用于提取緩沖液。

感謝英國(guó)劍橋大學(xué)的Ericka Havecker博士提供支持。

 

AGO1|Argonaute 1文獻(xiàn)參考:

Bressendorff et al. (2025). Importance of an N-terminal structural switch in the distinction between small RNA-bound and free ARGONAUTE. Nat Struct Mol Biol. 2025 Jan 7. doi: 10.1038/s41594-024-01446-9.

Nasfi et al. (2024). A pipeline for validation of Serendipita indica effector-like sRNA suggests cross-kingdom communication in the symbiosis with Arabidopsis. J Exp Bot . 2024 Dec 26:erae515. doi: 10.1093/jxb/erae515

Li et al. (2024). RNA helicase Brr2a promotes miRNA biogenesis by properly remodelling secondary structure of pri-miRNAs. Nat Plants . 2024 Oct;10(10):1532-1547. doi: 10.1038/s41477-024-01788-8.

Mirlohi et al. (2024). An AGO10: miR165/6 module regulates meristem activity and xylem development in the Arabidopsis root. EMBO J. 2024 May;43(9):1843-1869.doi: 10.1038/s44318-024-00071-y.

Martín-Merchán et al. (2024). Arabidopsis AGO1 N-terminal extension acts as an essential hub for PRMT5 interaction and post-translational modifications. Nucleic Acids Res . 2024 May 20:gkae387.doi: 10.1093/nar/gkae387.


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