用TurboID標(biāo)記蛋白質(zhì)可以研究不同類型細(xì)胞、器官和發(fā)育階段的蛋白質(zhì)相互作用。這是Mair等人（2019）所述的接近標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的合適工具。TurboID實(shí)現(xiàn)了擬南芥蛋白質(zhì)復(fù)合物和細(xì)胞類型特異性細(xì)胞器蛋白質(zhì)組的接近標(biāo)記。Elife。2019年9月19日；8:e47864。doi:10.7554/eLife.47864。

艾美捷BirA(突變/TurboID)：

貨號(hào)：AS20-4440

免疫原：重組突變型BirA蛋白，來源于大腸桿菌，使用以下質(zhì)粒生產(chǎn)：TurboID-His6_pET21a（質(zhì)粒編號(hào)#107177）。該蛋白在載體中表達(dá)，允許生成無His6標(biāo)簽的非標(biāo)記蛋白。

宿主：兔子

克隆性：多克隆

純度：免疫原親和純化的血清，溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）中。

形式：凍干

數(shù)量：50 ?g

復(fù)溶：復(fù)溶時(shí)加入50 ?l無菌水。

儲(chǔ)存：凍干品/復(fù)溶后儲(chǔ)存于-20°C；復(fù)溶后請(qǐng)分裝保存，避免反復(fù)凍融。打開前請(qǐng)短暫離心管子，以避免因物質(zhì)粘附在管蓋或管壁上而導(dǎo)致的損失。

測(cè)試應(yīng)用：免疫熒光（IF）、西方印跡（WB）

推薦稀釋度：1:5000（WB）

預(yù)期 | 表觀分子量：35 kDa

確認(rèn)的反應(yīng)性：BirA（突變型/TurboID）

預(yù)測(cè)的反應(yīng)性：mini TurboID

未反應(yīng)的：目前尚未發(fā)現(xiàn)與預(yù)測(cè)反應(yīng)性不符的已知例外。

應(yīng)用舉例：

樣品信息：

1-20 ?g擬南芥野生型Col-0（陰性對(duì)照）

2-20 ?g表達(dá)POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨(dú)立株系1）

3-20 ?g表達(dá)POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨(dú)立株系2）

4-20 ?g表達(dá)POI-TurboID融合蛋白的擬南芥（獨(dú)立株系3）

5-10 ng純化的TurboID（陽(yáng)性對(duì)照）

實(shí)驗(yàn)方法：

從擬南芥葉片材料中提取20 ?g總蛋白，提取緩沖液為稀釋的HENS（25 mM HEPES，pH 7.7；1 mM EDTA；2.5% SDS），并儲(chǔ)存于-80°C。樣品在95°C下用1x蛋白上樣緩沖液（0.5%十二烷基硫酸鈉、0.002%溴酚藍(lán)、10%甘油、50 mM Tris-HCl，pH 6.8）變性5分鐘。樣品在4-16%梯度SDS-PAGE凝膠上分離，并通過半干法轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜（孔徑0.45 ?m），轉(zhuǎn)印時(shí)間為1小時(shí)。膜在4°C下用5%脫脂奶粉（TBS-T）封閉過夜，期間不攪拌。膜在4°C下用TBS-T稀釋至1:5000的一抗孵育過夜，期間不攪拌。棄去抗體溶液后，膜用TBS-T快速?zèng)_洗，隨后在室溫下用TBS-T洗滌三次，每次10分鐘，期間攪拌。膜在室溫下用AGRISE

BirA(突變/TurboID)文獻(xiàn)參考：

Persyn et al. (2024).A Nitrogen-Specific Interactome Analysis Sheds Light on the Role of the SnRK1 and TOR Kinases in Plant Nitrogen Signaling. Mol Cell Proteomics. 100842. doi: 10.1016/j.mcpro.2024.100842.   

Liu et al. (2024). Activation of kappa opioid receptor suppresses post-traumatic osteoarthritis via sequestering STAT3 on the plasma membrane. Cell Commun Signal. 2024 Jun 18;22(1):335.doi: 10.1186/s12964-024-01709-4.  

Medica et al. (2023). Proximity-dependent mapping of the HCMV US28 interactome identifies RhoGEF signaling as a requirement for efficient viral reactivation. PLoS Pathog. 2023 Oct 2;19(10):e1011682.doi: 10.1371/journal.ppat.1011682.

Shi et al. (2023). Protocol to identify protein-protein interaction networks in Solanum tuberosum using transient TurboID-based proximity labeling. STAR Protoc. 2023 Sep 20;4(4):102577.doi: 10.1016/j.xpro.2023.102577.