PE-Cy5是屬于藻膽蛋白綴合物家族的串聯(lián)染料。在這種類型的串聯(lián)染料中，激發(fā)能可以從PE轉(zhuǎn)移到Cy5，zui大發(fā)射波長(zhǎng)為Cy5。PE-Cy5與FITC和PE具有zui小的光譜重疊，導(dǎo)致低熒光干擾。因此，它在實(shí)驗(yàn)中與FITC和PE聯(lián)合使用。需要注意的是，PE-Cy5不適合與APC配對(duì)，因?yàn)樗鼈兙哂酗@著的光譜重疊。與PE-Cy5相比，PE-Cy5.5對(duì)FITC、PE和APC的熒光干擾zui小，使其與這些染料的組合相容。此外，與PE-Cy5相比，PE-Cy5.5表現(xiàn)出更高的熒光強(qiáng)度。PE-Cy7與FITC沒(méi)有光譜重疊，與APC的重疊zui小，使其能夠與FITC、PE和APC結(jié)合使用。然而，需要注意的是，PE-Cy7對(duì)光漂白非常敏感，并且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要嚴(yán)格的光保護(hù)環(huán)境

艾美捷預(yù)活化，RPE-Cy5：

Cat #: B-CHM311 / B-CHM312 / B-CHM314 / B-CHM315

Size: 1 mg / 10 mg

Storage: Store at 4°C protected from light.

預(yù)活化，RPE-Cy5規(guī)格：

預(yù)活化，RPE-Cy5性質(zhì)：

形式：固體

純度：Amax/A280>5.0

運(yùn)輸和儲(chǔ)存

儲(chǔ)存條件：4°C保存，避光，不凍。

穩(wěn)定性：在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下穩(wěn)定至少6個(gè)月。

使用說(shuō)明

1.抗體修飾

1） 將抗體修飾試劑（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制備2mg/ml抗體修飾緩沖液。

2） 使用PBS緩沖液將待標(biāo)記抗體的濃度（純度>90%）調(diào)節(jié)至約5-10 mg/ml。向每毫克抗體中加入10μl抗體修飾緩沖液，輕輕混合。在室溫下攪拌混合物60-90分鐘。

3） 反應(yīng)完成后，將混合物轉(zhuǎn)移到離心過(guò)濾管中，并加入MES緩沖液。離心過(guò)濾器多次以除去過(guò)量的抗體修飾緩沖液。過(guò)濾器中收集的溶液是經(jīng)修飾的抗體，應(yīng)將其調(diào)節(jié)至1-5mg/ml的濃度。

2.PE串聯(lián)激活

1） 將PE串聯(lián)溶于0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中，濃度為5-10mg/ml。

2） 將SMCC溶解在無(wú)水二甲基亞砜中，制備10mg/ml的儲(chǔ)備溶液。

3） 每mg PE串聯(lián)染料添加Sμl SMCC（n（PE串聯(lián)）：n（SMCC）=1:80）。用鋁箔密封反應(yīng)混合物，并在室溫下旋轉(zhuǎn)1小時(shí)，使PE串聯(lián)上的氨基與琥珀酰亞胺酯反應(yīng)，形成衍生的PE串聯(lián)。

4） 反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到超濾離心管中，并在4℃、12000g下離心5分鐘以除去濾液。加入500μl MES緩沖液，混合并離心。重復(fù)此步驟5次。

5） 收集活化的PE串聯(lián)溶液。

3.活化的PE串聯(lián)與抗體的結(jié)合

1） 使用MES緩沖液將活化PE串聯(lián)的濃度調(diào)節(jié)至5 mg/ml。為了獲得活性PE串聯(lián)的準(zhǔn)確重量，我們建議使用活性PE串聯(lián)形式測(cè)量的消光系數(shù)（[PE串聯(lián)]=0.1245×A565，其中[PE串聯(lián)]是以mg/ml為單位的濃度，A565是565nm處的吸光度，優(yōu)選在0.3-0.8的范圍內(nèi)）。

2） 將修飾的抗體與活化的PE串聯(lián)以1:3的質(zhì)量比混合（3mg修飾的抗體的活化的PE串列排列）。在室溫下避光反應(yīng)2小時(shí)。

3） 將NEM溶解在無(wú)水二甲基亞砜（DMSO）中，制備12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步驟2）的反應(yīng)混合物中，每毫克抗體加入5μl-NEM溶液，以阻斷任何剩余的活性基團(tuán)。

4） 將步驟3）中的溶液轉(zhuǎn)移到離心過(guò)濾管中，并通過(guò)重復(fù)離心去除阻塞緩沖液。

5） 將標(biāo)記的抗體分成等分，加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?20°C下儲(chǔ)存以備將來(lái)使用。

注意事項(xiàng)：

1.活性PE串列應(yīng)在黑暗中冷藏。在貼標(biāo)簽的過(guò)程中，應(yīng)盡可能避免光線照射。

2.封閉試劑和修飾試劑應(yīng)新鮮配制，并立即使用。它們不應(yīng)該存放很長(zhǎng)時(shí)間。

3.標(biāo)記的抗體應(yīng)具有高特異性和不低于90%的純度。單克隆抗體是首選，溶液中不應(yīng)含有游離胺。zui好使用PBS。在標(biāo)記之前，抗體應(yīng)該耗盡NaN3和BSA。透析、濃縮和濃度測(cè)量等操作可能會(huì)導(dǎo)致抗體損失。因此，應(yīng)根據(jù)具體情況確定用于標(biāo)記的抗體的適當(dāng)量。

4.由于修飾抗體中引入的基團(tuán)對(duì)再氧化的敏感性，修飾后的抗體應(yīng)盡快與活化的PE串聯(lián)偶聯(lián)。

Biogradetech全球生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國(guó)加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。