PE-Cy5是屬于藻膽蛋白綴合物家族的串聯(lián)染料。在這種類型的串聯(lián)染料中，激發(fā)能可以從PE轉(zhuǎn)移到Cy5，zui大發(fā)射波長為Cy5。PE-Cy5與FITC和PE具有zui小的光譜重疊，導致低熒光干擾。因此，它在實驗中與FITC和PE聯(lián)合使用。需要注意的是，PE-Cy5不適合與APC配對，因為它們具有顯著的光譜重疊。與PE-Cy5相比，PE-Cy5.5對FITC、PE和APC的熒光干擾zui小，使其與這些染料的組合相容。此外，與PE-Cy5相比，PE-Cy5.5表現(xiàn)出更高的熒光強度。PE-Cy7與FITC沒有光譜重疊，與APC的重疊zui小，使其能夠與FITC、PE和APC結(jié)合使用。然而，需要注意的是，PE-Cy7對光漂白高度敏感，并且在實驗期間需要嚴格的光保護環(huán)境。

艾美捷RPE-Cy7串聯(lián)染料：

Cat #: B-CHM311 / B-CHM312 / B-CHM314 / B-CHM315

Size: 1 mg / 10 mg

Storage: Store at 4°C protected from light.

RPE-Cy7串聯(lián)染料性質(zhì)：

形式：溶液

純度：Amax/A280>5.0

運輸和儲存

儲存條件：4℃保存，避光，不凍。

穩(wěn)定性：在適當?shù)膬Υ鏃l件下穩(wěn)定至少6個月。

使用說明

1.抗體修飾

1） 將抗體修飾試劑（DTT/TCEP）溶于ddH2O中，制備2 mg/ml抗體修飾緩沖液。

2） 使用PBS緩沖液將待標記抗體的濃度（純度>90%）調(diào)節(jié)至約5-10 mg/ml。向每毫克抗體中加入10μl抗體修飾緩沖液，輕輕混合。在室溫下攪拌混合物60-90分鐘。

3） 反應(yīng)完成后，將混合物轉(zhuǎn)移到離心過濾管中，并加入MES緩沖液。離心過濾器多次以除去過量的抗體修飾緩沖液。過濾器中收集的溶液是經(jīng)修飾的抗體，應(yīng)將其調(diào)節(jié)至1-5mg/ml的濃度。

2.PE串聯(lián)激活

1） 將PE串聯(lián)溶于0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中，濃度為5-10mg/ml。

2） 將SMCC溶解在無水二甲基亞砜中，制備10mg/ml的儲備溶液。

3） 每mg PE串聯(lián)染料添加5ul SMCC（n（PE串聯(lián)）：n（SMCC）=1:80）。用鋁箔密封反應(yīng)混合物，并在室溫下旋轉(zhuǎn)1小時，使PE串聯(lián)上的氨基與琥珀酰亞胺酯反應(yīng)，形成衍生的PE串聯(lián)。

4） 反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到超濾離心管中，并在4℃、12000g下離心5分鐘以除去濾液。加入500μl MES緩沖液，混合并離心。重復此步驟5次。

5） 收集活化的PE串聯(lián)溶液。

3.活化的PE串聯(lián)與抗體的結(jié)合

1） 使用MES緩沖液將活化PE串聯(lián)的濃度調(diào)節(jié)至5 mg/ml。為了獲得活性PE串聯(lián)的準確重量，我們建議使用活性PE串聯(lián)形式測量的消光系數(shù)（[PE串聯(lián)]=0.1245×A565，其中[PE串聯(lián)]是以mg/ml為單位的濃度，A565是565nm處的吸光度，優(yōu)選在0.3-0.8的范圍內(nèi)）。

2） 將修飾的抗體與活化的PE串聯(lián)以1:3的質(zhì)量比混合（3mg修飾的抗體的活化的PE串列排列）。在室溫下避光反應(yīng)2小時。

3） 將NEM溶解在無水二甲基亞砜（DMSO）中，制備12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。每毫克抗體向步驟2）的反應(yīng)混合物中加入5μl的-NEM溶液，以阻斷任何剩余的活性基團。

4） 將步驟3）中的溶液轉(zhuǎn)移到離心過濾管中，并通過重復離心去除阻塞緩沖液。

5） 將標記的抗體分成等分，添加適當?shù)姆栏瘎⒃?20°C下儲存以備將來使用。

注意事項：

1.活性PE串列應(yīng)在黑暗中冷藏。在貼標簽的過程中，應(yīng)盡可能避免光線照射。

2.封閉試劑和修飾試劑應(yīng)新鮮配制，并立即使用。它們不應(yīng)該存放很長時間。

3.標記的抗體應(yīng)具有高特異性和不低于90%的純度。單克隆抗體是首選，溶液中不應(yīng)含有游離胺。zui好使用PBS。在標記之前，抗體應(yīng)該耗盡NaN3和BSA。透析、濃縮和濃度測量等操作可能會導致抗體損失。因此，應(yīng)根據(jù)具體情況確定用于標記的抗體的適當量。

4.由于修飾抗體中引入的基團對再氧化的敏感性，修飾后的抗體應(yīng)盡快與活化的PE串聯(lián)偶聯(lián)。

PE-Cy7:

Biogradetech全球生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。