熒光法HDAC6實(shí)驗(yàn)試劑盒是一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，旨在用于測(cè)量組蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）的活性，適用于篩選和分析應(yīng)用。該試劑盒采用便捷的96孔格式，包含進(jìn)行100次熒光HDAC6活性測(cè)定所需的所有試劑。此外，試劑盒還包含純化的HDAC6酶和一種強(qiáng)效的HDAC抑制劑——TSA（Trichostatin A），用于作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。熒光法HDAC6實(shí)驗(yàn)試劑盒基于一種獨(dú)特的熒光底物和顯色劑組合。該實(shí)驗(yàn)方法避免了傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中涉及的放射性、提取和色譜分析步驟。使用該試劑盒，只需在微孔板上進(jìn)行兩個(gè)簡(jiǎn)單的步驟即可分析HDAC活性水平。首先，將含有乙酰化賴氨酸側(cè)鏈的HDAC熒光底物與純化的HDAC酶孵育。去乙酰化作用使底物變得敏感，隨后用賴氨酸顯色劑處理時(shí)會(huì)產(chǎn)生熒光物質(zhì)，該物質(zhì)可通過(guò)熒光讀數(shù)儀進(jìn)行測(cè)量。

HDAC通過(guò)催化修飾蛋白中乙酰賴氨酸的乙酰基水解來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞過(guò)程。在HDAC實(shí)驗(yàn)中，熒光染料分子被連接到含有乙酰賴氨酸的肽段上。連接到肽段上會(huì)猝滅染料的熒光。經(jīng)過(guò)HDAC處理后，將反應(yīng)混合物與特異性針對(duì)非乙酰化賴氨酸的顯色溶液混合。如果HDAC已從賴氨酸上去除乙酰基，該溶液將釋放染料，從而允許熒光產(chǎn)生。因此，熒光與HDAC活性直接相關(guān)。

艾美捷HDAC6熒光檢測(cè)試劑盒（#BPQ-50076-1）應(yīng)用：  

適用于研究酶動(dòng)力學(xué)和篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量篩選（HTS）應(yīng)用。

所需材料（但未提供）：  

0.1%溶液（1 mg/ml）的牛血清白蛋白（BSA）水溶液  

能夠在350-380 nm激發(fā)和440-460 nm檢測(cè)的熒光光度計(jì)  

可調(diào)節(jié)微量移液器及無(wú)菌吸頭  

旋轉(zhuǎn)或搖床平臺(tái)  

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：  

1) 用HDAC實(shí)驗(yàn)緩沖液將TSA（Trichostatin A）的DMSO（200 ?M）母液稀釋10倍，制成20 ?M溶液。（僅制備實(shí)驗(yàn)所需的量；將剩余的TSA DMSO（200 ?M）母液分裝后在-80°C下保存）。  

2) 用HDAC實(shí)驗(yàn)緩沖液將熒光HDAC底物3（5 mM）母液稀釋25倍，制成200 ?M溶液。（僅制備實(shí)驗(yàn)所需的量；將剩余的5 mM母液分裝后在-80°C下保存）。  

3) 用HDAC實(shí)驗(yàn)緩沖液將重組人HDAC6酶稀釋至7 ng/?l（35 ng/反應(yīng)）*。將剩余的酶分裝后在-80°C下保存，稀釋后的酶需置于冰上。使用后丟棄剩余的稀釋酶。*注：最佳酶濃度可能因酶的比活性而異。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例：  

使用BPS Bioscience產(chǎn)品目錄號(hào)50076的熒光法HDAC6實(shí)驗(yàn)試劑盒測(cè)量的HDAC6酶活性。熒光使用Bio-Tek熒光微孔板讀數(shù)儀測(cè)量。數(shù)據(jù)為批次特異性。

文獻(xiàn)參考：

1. Santo, L., et al., Blood. 2012 Mar 15;119(11):2579-89.

2. Bradner, J.E., et al., Nat Chem Biol. 2010 Mar;6(3): 238-243.