核因子E2相關(guān)因子（Nrf2）是一種轉(zhuǎn)錄因子，通過結(jié)合抗氧化蛋白啟動(dòng)子區(qū)域的ARE（抗氧化反應(yīng)元件）來增加抗氧化蛋白的表達(dá)，從而協(xié)調(diào)抗氧化和抗炎反應(yīng)。在基礎(chǔ)條件下，Nrf2被細(xì)胞骨架蛋白Keap1保留在細(xì)胞質(zhì)中，Keap1是E3泛素連接酶復(fù)合物的底物識(shí)別亞基，它靶向Nrf2使其降解。氧化應(yīng)激暴露會(huì)導(dǎo)致Nrf2從Keap1釋放出來。Nrf2轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，在那里它結(jié)合ARE并誘導(dǎo)抗氧化蛋白和II相蛋白的表達(dá)，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。Nrf2和Keap1都是極具吸引力的治療靶點(diǎn)。

Keap1:Nrf2抑制劑篩選實(shí)驗(yàn)試劑盒是為鑒定Keap1:Nrf2結(jié)合抑制劑而設(shè)計(jì)的，利用熒光偏振（FP）技術(shù)，這是一種強(qiáng)大的工具，通過監(jiān)測(cè)熒光標(biāo)記分子與其結(jié)合伙伴結(jié)合時(shí)的旋轉(zhuǎn)流動(dòng)性變化來研究分子間相互作用。96孔格式的實(shí)驗(yàn)試劑盒包含足夠量的純化Keap1蛋白、含有ETGE基序的熒光素偶聯(lián)Nrf2肽段以及用于100次結(jié)合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)緩沖液。為了確定抑制劑對(duì)Keap1:Nrf2復(fù)合物形成的影響，將Keap1蛋白和熒光Nrf2肽段在有或沒有測(cè)試抑制劑的情況下孵育30分鐘。使用能夠測(cè)量熒光偏振的微孔板讀數(shù)儀來測(cè)量Nrf2肽段的旋轉(zhuǎn)流動(dòng)性變化。

艾美捷KEAP1-Nrf2抑制劑篩選檢測(cè)試劑盒：

貨號(hào)：BPQ-72020

別名：Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1，Nrf2的細(xì)胞質(zhì)抑制劑，INRF2，Kelch樣蛋白19，KIAA0132，KLHL19

實(shí)驗(yàn)試劑盒形式：熒光偏振  

物種：人  

提供形式：96孔格式的實(shí)驗(yàn)試劑盒包含足夠量的純化Keap1蛋白、含有ETGE基序的熒光素偶聯(lián)Nrf2肽段以及用于100次結(jié)合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)緩沖液。

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性：按照說明儲(chǔ)存時(shí)，該實(shí)驗(yàn)試劑盒在收到之日起6個(gè)月內(nèi)可達(dá)到最佳性能。

應(yīng)用： 適用于研究酶動(dòng)力學(xué)和篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量應(yīng)用。

運(yùn)輸溫度：-80°C  

科學(xué)分類：泛素化  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

驗(yàn)證數(shù)據(jù)：  

左側(cè)：Keap1與Nrf2的結(jié)合。  

右側(cè)：Nrf2抑制劑對(duì)Keap1:Nrf2結(jié)合的抑制。  

使用Keap1:Nrf2抑制劑篩選實(shí)驗(yàn)試劑盒（BPS Bioscience #72020）測(cè)量了結(jié)合情況。Nrf2抑制劑KI696（Medchem Express #HY-101140）與Nrf2肽段和Keap1在不同濃度下共同孵育。熒光偏振在λex 485 nm激發(fā)和λem 530 nm發(fā)射下通過Bio-Tek熒光微孔板讀數(shù)儀進(jìn)行測(cè)量。  

文獻(xiàn)參考：

Inoyama, D., et al. 2012. J. Biomol. Screening 17(4): 435-447