PCSK9-LDLR TR-FRET實(shí)驗(yàn)試劑盒旨在以均相384孔反應(yīng)格式測量對PCSK9與LDLR結(jié)合的抑制作用。PCSK9已知通過與LDLR胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，作為肝臟低密度脂蛋白受體（LDLRs）的負(fù)調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用。基于FRET的實(shí)驗(yàn)無需繁瑣的洗滌步驟，使其特別適用于高通量篩選應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)操作流程簡單直接：將含有Eu（銪）標(biāo)記的LDLR胞外結(jié)構(gòu)域、染料標(biāo)記的受體、生物素標(biāo)記的PCSK9以及抑制劑的樣品孵育兩小時。隨后，使用熒光讀數(shù)儀測量熒光強(qiáng)度。

艾美捷PCSK9-LDLR TR-FRET檢測試劑盒：

貨號：BPQ-72010

別名：pcsk9、膽固醇、LDL、kexin  

實(shí)驗(yàn)試劑盒形式：TR-FRET（時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移）  

物種：人  

提供形式：試劑盒采用便捷的格式，包含生物素標(biāo)記的PCSK9、Eu（銪）標(biāo)記的LDLR、染料標(biāo)記的受體、實(shí)驗(yàn)緩沖液和微孔板，可進(jìn)行384次反應(yīng)。  

所需材料（但未提供）：  

能夠測量時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）的熒光微孔板讀數(shù)儀  

可調(diào)節(jié)微量移液器及無菌吸頭  

儲存/穩(wěn)定性：按照說明儲存時，該試劑盒自收到之日起有效期至少為6個月。  

應(yīng)用：適用于篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量篩選（HTS）應(yīng)用。  

運(yùn)輸溫度：-80°C  

注意事項(xiàng)：避免反復(fù)凍融。

結(jié)果計(jì)算：  

應(yīng)進(jìn)行兩次連續(xù)測量。首先測量Tb（鋱）供體的發(fā)射光（620 nm），隨后測量染料受體的發(fā)射光（665 nm）。數(shù)據(jù)分析通過計(jì)算TR-FRET比值（665 nm發(fā)射光/620 nm發(fā)射光）進(jìn)行。  

如果需要，數(shù)據(jù)可以歸一化為抑制百分比。通常在抑制劑篩選中，將陽性對照的FRET值設(shè)為0%抑制，陰性對照的FRET值設(shè)為100%抑制。  

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例：    

圖：PCSK9與LDLR的相互作用。

文獻(xiàn)參考：

1. Chan, J.C. et al. (2009). Proc. Natl Acad. Sci. USA, 106, 9820-9825.

2. Liang, H., et al. (2012) J. Pharmacol. Exp. Ther. 340 2289-236.