組蛋白H2A變體H2A的乙酰化。Z與活性基因的啟動(dòng)子有關(guān)

兔抗組蛋白H2A的多克隆抗體。Z在賴氨酸5、7和11處乙酰化，使用KLH偶聯(lián)的合成肽。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品Anti-H2A.Zac多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H2A.Zac多克隆抗體：

單克隆性：多克隆  

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水性緩沖溶液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS  

濃度：50 ?g/72 ?l  

免疫原：合成肽  

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性  

儲(chǔ)存于–80°C，最長(zhǎng)可達(dá)2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收率。分裝以避免反復(fù)凍融循環(huán)。分裝樣本可在–20°C下至少儲(chǔ)存一個(gè)月。

針對(duì)H2A.Zac的抗體的ChIP結(jié)果 ： 

使用HeLa細(xì)胞、針對(duì)H2A.Zac的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25228）以及優(yōu)化的qPCR引物對(duì)進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。ChIP實(shí)驗(yàn)使用了100萬HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)。實(shí)驗(yàn)中使用了1、2、5和10 ?g的抗體梯度，并以IgG（2 ?g/IP）作為陰性免疫沉淀對(duì)照。qPCR使用特異性引物針對(duì)ACTB和EIF4A2基因的啟動(dòng)子（作為陽性對(duì)照靶標(biāo)）以及MYT1基因的編碼區(qū)（作為陰性對(duì)照靶標(biāo)）。圖1顯示了回收率（免疫沉淀DNA相對(duì)于輸入DNA的相對(duì)量）。這些結(jié)果證實(shí)了H2A.Z乙酰化存在于活躍啟動(dòng)子上的觀察結(jié)果。

針對(duì)H3K9/14ac的抗體的ChIP-seq結(jié)果  ：

使用1 ?g針對(duì)H2A.Zac的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25228）對(duì)100萬HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。以IgG（2 ?g/IP）作為陰性免疫沉淀對(duì)照。免疫沉淀DNA通過QPCR進(jìn)行分析（如圖2A所示）。隨后，免疫沉淀DNA通過Illumina基因組分析儀進(jìn)行分析。文庫制備、簇生成和測(cè)序均按照制造商的說明進(jìn)行。36 bp標(biāo)簽通過ELAND算法與人類基因組比對(duì)。圖2顯示了整個(gè)序列的峰分布以及X染色體上600 kb區(qū)域（圖2B和C）和EIF4A2、ACTB和GAPDH基因周圍100 kb區(qū)域（圖2D、E和F）的分布。這些結(jié)果清楚地顯示了H2A.Z乙酰化在活躍基因啟動(dòng)子上的富集。

抗體效價(jià)測(cè)定  ：

為了測(cè)定抗體的效價(jià)，采用ELISA方法，使用針對(duì)H2A.Zac（產(chǎn)品編號(hào)25228）的抗體稀釋液、粗血清和流穿液在抗原包被的孔中進(jìn)行檢測(cè)。所用抗原為含有感興趣組蛋白修飾的肽。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖3），估計(jì)純化抗體的效價(jià)為1:8,800。

針對(duì)H2A.Zac的抗體的交叉反應(yīng)性測(cè)試  ：

采用點(diǎn)樣分析法（Dot Blot）測(cè)試針對(duì)H2A.Zac（產(chǎn)品編號(hào)25228）的抗體與其他組蛋白乙酰化修飾和未修飾的H2A.Z序列的交叉反應(yīng)性。將100至0.2皮摩爾的相應(yīng)肽點(diǎn)樣于膜上。抗體稀釋度為1:20,000。圖4顯示該抗體對(duì)感興趣的修飾具有高特異性。

針對(duì)H2A.Zac的抗體的免疫熒光實(shí)驗(yàn)  ：

HeLa細(xì)胞用針對(duì)H2A.Zac的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25228）和DAPI進(jìn)行染色。細(xì)胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進(jìn)行封閉。細(xì)胞用H2A.Zac抗體（左側(cè)）以1:500的稀釋度在封閉液中進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，隨后用與Alexa488偶聯(lián)的抗兔抗體進(jìn)行標(biāo)記。中間面板顯示DAPI對(duì)細(xì)胞核的染色。右側(cè)顯示兩種染色的合并圖。

應(yīng)用  ：

- ChIP/ChIP-seq（1 ?g/ChIP）  

- ELISA（1:500 – 1:200）  

- 點(diǎn)樣分析（DB，1:20,000）  

- 免疫熒光（IF，1:500）  

運(yùn)輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應(yīng)性：人  

注意事項(xiàng)：最終用戶應(yīng)確定每次免疫沉淀的最佳抗體用量。我們建議測(cè)試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復(fù)凍融循環(huán)。  

科學(xué)分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

產(chǎn)品數(shù)據(jù)庫：

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務(wù)。