組蛋白H3上賴氨酸27的三甲基化（H3K27me3）與植物和動物發(fā)育及疾病過程中的轉(zhuǎn)錄抑制密切相關(guān)。這種修飾由多梳抑制復(fù)合體2（PRC2，由EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶催化）維持，并可通過賴氨酸去甲基化酶（如JMJD3）去除。

以小鼠為宿主制備的針對組蛋白H3在賴氨酸27位點三甲基化（H3K27me3）的單克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品Anti-H3K27me3單克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me3單克隆抗體：

同種型：IgG1

克隆性：單克隆

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：小鼠

純化方法：Protein A純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/50 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長達(dá)2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收。分裝以避免反復(fù)凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結(jié)果

使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在人HeLa細(xì)胞中進(jìn)行ChIP實驗。實驗使用了100萬細(xì)胞的剪切染色質(zhì)。抗體用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進(jìn)行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因c-fos和GAPDH的啟動子引物作為陰性對照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陽性對照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結(jié)果與H3K27me3主要存在于非活性基因中的觀察結(jié)果一致。

抗體的交叉反應(yīng)性測試

為了測試特異性，使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243）進(jìn)行ELISA實驗，抗體進(jìn)行梯度稀釋。實驗孔分別包被了含有未修飾的H3K27區(qū)域以及單甲基化、二甲基化和三甲基化H3K27以及三甲基化H3K9的肽段。圖2顯示抗體對目標(biāo)修飾的肽段具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243），對HeLa細(xì)胞的組蛋白提取物（15 ?g）進(jìn)行Western Blot分析。抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側(cè)標(biāo)記了目標(biāo)蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標(biāo)記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

HeLa細(xì)胞用針對H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號25243）和DAPI進(jìn)行染色。細(xì)胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進(jìn)行封閉。細(xì)胞用H3K27me3抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:500進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，隨后用與Alexa594偶聯(lián)的抗小鼠抗體進(jìn)行二抗標(biāo)記。中間圖顯示了DAPI對細(xì)胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應(yīng)用

ChIP（1 - 2 ?l/ChIP）

ELISA（1:3000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運(yùn)輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應(yīng)性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體最佳用量應(yīng)由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復(fù)凍融。

科學(xué)分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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