組蛋白是真核細胞染色體蛋白部分的主要成分，富含精氨酸和賴氨酸，并在進化過程中高度保守。組蛋白將DNA緊密包裝成染色質(zhì)。每類核心組蛋白H2A、H2B、H3和H4各有兩個組裝在一起，并被146個堿基對的DNA包裹，形成一個八聚體核小體。組蛋白尾部會發(fā)生多種翻譯后修飾，這些修飾可以直接或間接改變?nèi)旧|(zhì)結構，從而促進轉(zhuǎn)錄激活或抑制或其他核過程。除了遺傳密碼之外，不同組蛋白修飾的組合揭示了所謂的“組蛋白密碼”。組蛋白的甲基化和去甲基化分別由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去甲基化酶動態(tài)調(diào)控。針對含有未修飾賴氨酸4（H3K4un）的組蛋白H3的小鼠單克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。  

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品Anti-H3K4un單克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K4un單克隆抗體：

克隆性：單克隆  

宿主物種/表達系統(tǒng)：小鼠  

純化方法：Protein A純化  

形式：水溶液緩沖液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS溶液  

濃度：50 ?g/50 ?l  

免疫原：合成肽  

儲存/穩(wěn)定性  

在–80°C下可保存長達2年。首次解凍后離心以最大化產(chǎn)品回收。分裝以避免反復凍融循環(huán)。分裝可在–20°C下保存至少一個月。

實驗條件  

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）結果  

使用HeLa細胞、針對H3K4un的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25258）以及優(yōu)化的qPCR引物集進行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗。實驗中使用10?個細胞的剪切染色質(zhì)。抗體用量分別為1 ?g、5 ?g和10 ?g/ChIP進行梯度實驗分析。以5 ?g IgG作為陰性免疫沉淀（IP）對照。通過qPCR分析，使用特異性引物檢測GAPDH啟動子和肌紅蛋白基因的第2外顯子。圖1顯示了回收率，以輸入DNA的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量）。

單克隆抗體的交叉反應性  

為測試特異性，使用針對H3K4un的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25258）進行ELISA實驗，采用該抗體的系列稀釋液。實驗中使用了含有未修飾的H3K4區(qū)域以及單甲基化、雙甲基化和三甲基化H3K4的肽段進行包被。圖2顯示該抗體對未修飾肽段具有高度特異性。

Western Blot分析  

使用針對H3K4un的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25258）對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析，抗體稀釋度為1:1,000，使用含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween緩沖液。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光實驗  

使用針對H3K4un的抗體（產(chǎn)品編號25258）和DAPI對HeLa細胞進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進行封閉。細胞用H3K4un抗體（左側(cè)）以1:500的比例稀釋在封閉液中進行免疫熒光標記，隨后使用與Alexa594偶聯(lián)的抗小鼠抗體進行二抗標記。中間圖顯示DAPI對細胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應用  

- 染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）：1 – 5 ?g/ChIP  

- 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：1:5000  

- Western Blot（WB）：1:1000  

- 免疫熒光（IF）：1:500  

運輸溫度：–20°C或–80°C  

物種反應性：人  

交叉反應性：僅識別未甲基化的H3K4（H3K4me0），不顯著結合甲基化的H3K4（H3K4me1、H3K4me2或H3K4me3）。  

注意事項：每IP的最佳抗體用量應由最終用戶確定。建議測試1–5 ?g/IP。  

警告：避免反復凍融循環(huán)。  

科學分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務。