針對組蛋白H3在賴氨酸9和14位點乙酰化（H3K9/14ac）的多克隆抗體，使用KLH偶聯合成肽進行免疫。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品Anti-H3K9/14ac多克隆抗體。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K9/14ac多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔  

純化方式：親和純化  

形式：水溶液緩沖液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS  

濃度：50 ?g/36 ?l  

免疫原：合成肽  

背景：H3K9/14的乙酰化富集于活性基因的啟動子附近。  

儲存/穩(wěn)定性  

在-80°C下儲存，最長可達2年。首次解凍后離心以最大化產品回收。分裝以避免反復凍融。分裝樣本可在-20°C下至少保存一個月。

針對H3K9/14ac的抗體進行的染色質免疫沉淀（ChIP）結果  

使用HeLa細胞、針對H3K9/14ac的抗體（貨號25264）和優(yōu)化的qPCR引物對進行ChIP實驗。實驗使用了150萬細胞的剪切染色質。分析了1、2、5和10 ?g抗體的滴定實驗。使用5 ?g/IgG作為陰性免疫沉淀對照。使用針對ACTB基因啟動子的特異性引物作為陽性對照靶點，以及針對MB基因外顯子2的引物作為陰性對照靶點進行qPCR。圖1顯示了回收率（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量）。這些結果證實了H3K9/14乙酰化存在于活性啟動子上的觀察結果。

針對H3K9/14ac的抗體進行的ChIP-seq結果  

使用1 ?g針對H3K9/14ac的抗體（貨號25264）在100萬HeLaS3細胞的剪切染色質上進行ChIP實驗。使用2 ?g/IgG作為陰性免疫沉淀對照。使用針對活性GAPDH和c-fos基因啟動子的優(yōu)化PCR引物對進行qPCR分析，作為陽性對照靶點；使用非活性MB基因的編碼區(qū)和Sat2衛(wèi)星重復序列作為陰性對照靶點（圖2A）。隨后，對免疫沉淀的DNA進行Illumina基因組分析儀分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商的說明進行。36 bp的標簽通過ELAND算法與人類基因組進行比對。圖2顯示了完整序列和X染色體800 kb區(qū)域（圖2B和C）以及圍繞RBM3、GAPDH和c-fos基因的100 kb區(qū)域（圖2D、E和F）的峰分布。這些結果清楚地顯示了H3K9/14雙重乙酰化在活性基因啟動子上的富集。

抗體滴度測定  

為測定抗體滴度，使用針對H3K9/14ac（貨號25264）的抗體進行ELISA實驗，采用梯度稀釋法，粗提血清和流穿液在抗原包被的孔中進行檢測。使用的抗原是含有感興趣組蛋白修飾的肽。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關系圖（圖3），估計純化抗體的滴度為1:5,900。

針對H3K9/14ac的抗體交叉反應性測試  

通過點樣分析（Dot Blot）測試針對H3K9/14ac（貨號25264）的抗體與其他組蛋白修飾和未修飾H3K9/14序列的肽的交叉反應性。將100至0.2 pmol的相應肽點樣在膜上。抗體使用1:20,000的稀釋度。圖4顯示了抗體對感興趣修飾的高度特異性。

Western Blot分析  

使用針對H3K9/14ac（貨號25264）的抗體對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析，抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1,000。感興趣的蛋白位置在右側標出，左側為分子量標記（單位為kDa）。

免疫熒光分析  

使用針對H3K9/14ac（貨號25264）的抗體和DAPI對小鼠NIH3T3細胞進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100封閉。細胞用H3K9/14ac抗體（左側）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后使用與Alexa488偶聯的抗兔抗體進行檢測。中間面板顯示DAPI對細胞核的染色。右側為兩種染色的合并圖。

應用  

ChIP/ChIP-seq（1-2 ?g/IP）  

ELISA（1:100）  

點樣分析（Dot Blot，1:20,000）  

Western Blot（1:1000）  

免疫熒光（Immunofluorescence，IF，1:500）  

運輸溫度：-20°C或-80°C  

物種反應性：人、小鼠  

注意事項：每IP的最佳抗體用量應由終端用戶確定。建議測試1-5 ?g/IP。  

警告：避免反復凍融。  

科學分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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