重組HEK293細(xì)胞表達(dá)狨猴（Macaca fascicularis）GPRC5D（孤兒G蛋白偶聯(lián)受體，C類群5成員D，登錄號(hào)XP_005570250.1），受CMV啟動(dòng)子控制。

背景

孤兒G蛋白偶聯(lián)受體，C類群5成員D（GPRC5D）是一種視黃酸誘導(dǎo)蛋白，具有七個(gè)跨膜片段和一個(gè)短的N末端細(xì)胞外區(qū)域。GPRC5D在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的強(qiáng)烈和選擇性表達(dá)，與B細(xì)胞成熟抗原（BCMA）的表達(dá)模式相似，使其成為治療多發(fā)性骨髓瘤的有希望的靶點(diǎn)。預(yù)計(jì)GPRC5D將成為多發(fā)性骨髓瘤免疫療法中CAR T細(xì)胞的替代靶點(diǎn)。

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品GPRC5D （狨猴）HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

1. 狨猴GPRC5D結(jié)合實(shí)驗(yàn)；篩選GPRC5D配體和抗體。

2. 作為抗GPRC5D CAR-T開發(fā)的靶細(xì)胞。

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約60秒。細(xì)胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部?jī)?nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B）的試管中。在37°C水浴中放置細(xì)胞過(guò)久將導(dǎo)致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在5 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B）中重懸。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1（不含潮霉素B），并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在完全融合前傳代。在首次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基1C（含潮霉素B）。

細(xì)胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% 胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1C并轉(zhuǎn)移到試管中。以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在含潮霉素B的生長(zhǎng)培養(yǎng)基1C中重懸。按照每周1:5的期望亞培養(yǎng)比例將細(xì)胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% 胰酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基1C并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重懸，細(xì)胞濃度約為2 x 10^6個(gè)細(xì)胞/ml。

4. 將1 ml的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過(guò)夜。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

注意：建議在早期傳代時(shí)擴(kuò)增細(xì)胞并至少冷凍10個(gè)小瓶以備將來(lái)使用。

圖1. 利用流式細(xì)胞儀分析狨猴GPRC5D HEK293細(xì)胞系表面GPRC5D的表達(dá)。

狨猴GPRC5D HEK293細(xì)胞（藍(lán)色）或?qū)φ誋EK293細(xì)胞（綠色）使用GPRC5D APC偶聯(lián)抗體（R&D Systems, #FAB6300A）染色，并通過(guò)流式細(xì)胞儀分析GPRC5D的表達(dá)。

相關(guān)產(chǎn)品：

Products Catalog # Size

GPRC5D (Cynomolgus) CHO Cell Line 78338 2 vials

GPRC5D CHO Cell Line 78337 2 vials

GPRC5D HEK293 Cell Line 78345 2 vials

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、新型冠狀病毒、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務(wù)。