Human T-Activator CD3/CD28 Beads旨在用于人類T細胞的分離和體外擴增。它可應(yīng)用于CAR-T和其他T細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用。Human T-Activator CD3/CD28 Beads由直徑為4.5 μm的磁性珠子與抗人CD3和抗人CD28抗體結(jié)合而成，為人類T細胞的分離和擴增提供了簡單的方法。

首先，人T 細胞激活磁珠，CD3/CD28單抗偶聯(lián)磁珠能夠輕松將CD3+ T細胞從外周血單個核細胞(PBMCs)中分離和濃縮。在分離后，磁性珠子上的抗CD3和抗CD28抗體的共價結(jié)合提供了調(diào)節(jié)T細胞活化和擴增所需的初級和共刺激信號。

在細胞擴增過程中，細胞培養(yǎng)需要額外添加其他細胞因子，如人源IL-2、IL-7和IL-15，以實現(xiàn)更高效的活化。在10-13天的培養(yǎng)期內(nèi)，激活的細胞可以擴增1000倍。

艾美捷人T 細胞激活磁珠，CD3/CD28單抗偶聯(lián)磁珠:

貨號：C-BETA2001

規(guī)格：1mL/10mL

儲存：2°C至8°C，請勿冷凍

操作步驟：洗滌Human T-Activator CD3/CD28 Beads

1. 將Human T-Activator CD3/CD28 Beads（珠子）重新懸浮于管中（振蕩30秒以上，或者傾斜旋轉(zhuǎn)5分鐘）。

2. 將珠子轉(zhuǎn)移到容器中，加入所需體積。

3. 加入相同體積的PBS（含1% HSA）。如果珠子體積小于1mL，加入1mL含1% HSA的PBS進行懸浮。

4. 將管子放在磁架上1分鐘，然后棄掉上清液。

5. 將管子從磁架上取下，使用相同體積的含1% HSA的PBS重新懸浮珠子。

分離CD3+ T細胞

1. 對于Ficoll分離的PBMCs，輕輕將細胞懸浮于含1% HSA的PBS中，并將細胞密度調(diào)整為2-5 × 107 cells/mL。注意細胞總數(shù)不應(yīng)超過2 × 108 cells/mL。注意：在開始之前，通過流式細胞術(shù)確定樣品中CD3+ T細胞的百分比。

2. 將洗滌后的珠子以3（珠子）：1（CD3+ T細胞）的比例加入PBMCs中，如果細胞是純分離的T細胞，則將珠子與細胞的比例調(diào)整為1：1。

3. 以50~120 rpm/min的速度旋轉(zhuǎn)樣品，并在室溫下孵育30分鐘。

4. 用T細胞培養(yǎng)基或含1% HSA的PBS稀釋珠子和細胞混合物，以確保磁選分離的體積。然后將管子放在磁架上1~2分鐘。

5. 去除上清液，然后用含300IU/mL IL-2的T細胞培養(yǎng)基重新懸浮珠子和細胞混合物，并將細胞密度調(diào)整為0.5 × 106 cells/mL~1 × 106 cells/mL。

6. 將細胞懸液放入37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育。

T細胞的活化和擴增:

1. 從培養(yǎng)的第3天開始，每天計算T細胞的數(shù)量。

2. 在細胞擴增的后期，定期輕輕吹動培養(yǎng)中的細胞懸液，以分離珠子和細胞。

3. 當(dāng)CD3+ T細胞數(shù)量超過1 × 106 cells/mL時，加入含IL-2的T細胞培養(yǎng)基稀釋細胞，并將細胞密度調(diào)整到約0.5 × 105 cells/mL左右。

4. 在培養(yǎng)結(jié)束時（第9-14天），計數(shù)細胞并用磁架去除珠子。

人T 細胞激活磁珠，CD3/CD28單抗偶聯(lián)磁珠數(shù)據(jù)參考：

圖1：磁選分離CD3+ T細胞。PBMCs與Human T-Activator CD3/CD28 Beads（目錄號C-BETA2001）以3個珠子與每個細胞的比例孵育30分鐘，通過流式細胞術(shù)分析陽性（分離）細胞的分離效率。

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