背景：

PNGase F（肽 N- 糖苷酶 F）來(lái)源于 Elizabethkingia miricola，是一種高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGase F 的切割位點(diǎn)為糖蛋白內(nèi)側(cè) N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時(shí)將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。

艾美捷肽N-糖苷酶 F（His標(biāo)簽）：

Cat #: C-BSM3303

Size: 15000 U / 75000 U

Storage: -20°C

肽N-糖苷酶 F（His標(biāo)簽）組分：

酶活性定義：

一個(gè)單位（U）的酶活性是指在10μl反應(yīng)系統(tǒng)中，在37°C下1小時(shí)，從10μg變性RNase B中去除95%以上的碳水化合物所需的酶量。

滅活條件：

在75°C下培養(yǎng)10分鐘。

質(zhì)量控制

蛋白質(zhì)純度檢測(cè)：

產(chǎn)品經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)，純度≥95%。糖苷酶和蛋白酶活性檢測(cè)：

沒(méi)有可檢測(cè)的內(nèi)切糖苷酶F1、F2或F3活性；沒(méi)有可檢測(cè)的蛋白酶活性。

使用說(shuō)明：

1.在變性條件下的脫糖基化：

① 將1-20μg糖蛋白、1μl 10×變性緩沖液和ddH20（如有必要）混合至總體積為10μl。

注：10倍變性緩沖液在低溫下儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)有白色沉淀。使用前在37°C下培養(yǎng)即可溶解。

② 在100°C下孵育10分鐘，使糖蛋白變性，然后在冰上冷卻并離心10秒。

③加入2μl 10×PNGase F緩沖液，2μl 10%NP-40，并補(bǔ)充ddH20，使總反應(yīng)體積為20μl。④加入1-2μl PNGase F，輕輕攪拌，在37℃下孵育1-3小時(shí)。

2.在非變性條件下的脫糖基化：

① 將1-20μg糖蛋白、2μl 10×PNGase F緩沖液和ddH20（如有必要）混合至總體積為20μl。

② 加入2-5μl PNGase F，輕輕混合。

③ 在37°C下培養(yǎng)4-24小時(shí)。

PNGase F的去除：

該產(chǎn)物含有His標(biāo)簽，反應(yīng)后，PNGase F可以通過(guò)親和層析從靶糖蛋白中使用不同的標(biāo)簽去除。

本試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

Biogradetech是生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國(guó)加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。