受損組織會啟動一系列復(fù)雜且有條不紊的事件，以修復(fù)受損區(qū)域。這些事件可能包括通過血管生成因子增加血管化、細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)沉積的增加，以及炎癥免疫細(xì)胞的浸潤，作為摧毀壞死組織的過程的一部分。傷口愈合過程始于細(xì)胞向傷口極化、開始突出、遷移并關(guān)閉傷口區(qū)域。這些過程反映了單個細(xì)胞以及整個組織復(fù)合體的行為。

多年來，研究人員一直使用傷口愈合實(shí)驗(yàn)來研究細(xì)胞極化、組織基質(zhì)重塑，或者估算不同細(xì)胞和培養(yǎng)條件下的細(xì)胞增殖和遷移速率。傷口愈合實(shí)驗(yàn)已被用于研究細(xì)胞極性以及通過Rho家族GTP酶、微管和高爾基體的方向、p53在細(xì)胞遷移中的作用以及其他生理過程對肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的調(diào)控。這些實(shí)驗(yàn)通常涉及培養(yǎng)一個匯合的單層細(xì)胞，然后通過在單層中劃線來移位或破壞一組細(xì)胞。由這個“傷口”產(chǎn)生的開放空隙隨后會在細(xì)胞移動并填充受損區(qū)域的過程中被顯微鏡檢查。這種“愈合”效果可能需要幾個小時到幾天不等，具體取決于細(xì)胞類型、條件以及“受損”區(qū)域的表面積。

這些“劃痕傷口”實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)是缺乏明確定義的傷口表面積，或者細(xì)胞之間的空隙。這些傷口的大小和寬度各不相同，這阻礙了結(jié)果的一致性，并在孔與孔之間造成了差異。此外，“劃痕傷口”實(shí)驗(yàn)通常會對傷口邊緣的細(xì)胞造成損傷，這可能會阻止細(xì)胞遷移到傷口部位并進(jìn)行愈合。

艾美捷CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒（#CBA-120）通過提供專有的處理過的插件克服了這種不一致性，這些插件可以產(chǎn)生一個明確定義的傷口區(qū)域或空隙。細(xì)胞被培養(yǎng)直到它們在插件周圍形成單層。移除插件后，會在細(xì)胞之間留下一個精確的0.9毫米開放的“傷口區(qū)域”。此時可以對細(xì)胞進(jìn)行處理并監(jiān)測其遷移到傷口區(qū)域的增殖情況。通過在特定時間點(diǎn)固定樣本或進(jìn)行延時顯微鏡檢查，可以測量這些事件的進(jìn)展。

CytoSelect?傷口愈合實(shí)驗(yàn)試劑盒包括專有的“傷口區(qū)域”插件，用于檢測細(xì)胞的遷移和傷口愈合特性。該試劑盒包含足夠的試劑，可用于評估24個樣本。這種插件適用于大多數(shù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件。產(chǎn)生的0.9毫米傷口區(qū)域與大多數(shù)顯微鏡和成像系統(tǒng)兼容。

測定原理：

CytoSelect? 24孔傷口愈合實(shí)驗(yàn)試劑盒包含2個24孔板，每個板包含12個專有的處理過的塑料插件。這些插件可以創(chuàng)建一個0.9毫米明確定義的傷口區(qū)域，用于測量細(xì)胞的遷移和增殖速率。遷移的細(xì)胞能夠伸出突起，并最終侵入并關(guān)閉傷口區(qū)域。可以使用手動固定和顯微鏡成像來確定細(xì)胞的增殖和遷移速率。提供固定溶液以在特定時間點(diǎn)停止細(xì)胞。還提供細(xì)胞染色劑和DAPI染色劑，以便在光學(xué)和熒光顯微鏡下查看結(jié)果。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. CBA-100：CytoSelect? 24孔細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（8微米，比色法）

2. CBA-101：CytoSelect? 24孔細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（8微米，熒光法）

3. CBA-102：CytoSelect? 24孔細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（5微米，熒光法）

4. CBA-107：CytoSelect? 24孔細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（12微米，比色法）

5. CBA-125：Radius? 24孔細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（顯微鏡法）

CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒組成（室溫運(yùn)輸）：

1. 24孔傷口愈合實(shí)驗(yàn)板（部件編號112001）：兩個24孔板，每個板包含12個傷口區(qū)域插件

2. 細(xì)胞染色溶液（部件編號11002）：一個10毫升瓶子

3. DAPI熒光染色劑（1000倍）（部件編號112002）：一個30微升小瓶

4. 固定溶液（部件編號122402）：一個20毫升瓶子

未提供的材料：

1. 遷移細(xì)胞系和培養(yǎng)基

2. 帶DAPI濾光片（350納米/470納米）的光學(xué)/熒光顯微鏡

3. 用于測量傷口閉合的成像軟件

4. 鑷子

5. 磷酸鹽緩沖液（PBS）

儲存條件：

收到后，將DAPI熒光染色劑轉(zhuǎn)移到-20攝氏度。將所有其他組分儲存于4攝氏度。

結(jié)果計算：

閉合百分比：

1. 確定明確定義的傷口區(qū)域的表面積。總表面積 = 0.9毫米 × 長度

2. 確定遷移到傷口區(qū)域的細(xì)胞的表面積。遷移細(xì)胞表面積 = 細(xì)胞遷移長度（毫米） × 2 × 長度

3. 閉合百分比（%） = 遷移細(xì)胞表面積 / 總表面積 × 100

遷移速率：

確定細(xì)胞進(jìn)入明確定義的傷口區(qū)域的遷移速率：

遷移速率 = 細(xì)胞遷移長度（納米） / 遷移時間（小時）

結(jié)果示例：

下圖展示了使用CytoSelect? 24孔傷口愈合實(shí)驗(yàn)試劑盒的典型結(jié)果。不應(yīng)使用這些數(shù)據(jù)來解釋實(shí)際結(jié)果。

圖：MEF/STO細(xì)胞的閉合百分比。使用CytoSelect? 24孔傷口愈合實(shí)驗(yàn)對STO細(xì)胞進(jìn)行測試。細(xì)胞培養(yǎng)24小時，直到形成單層，此時移除插件以開始傷口愈合實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞通過相差顯微鏡（未顯示）、DAPI標(biāo)記和細(xì)胞染色來監(jiān)測，以確定閉合百分比（0%，50%，75%和100%）。

CytoSelect 24孔板傷口愈合分析試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Ridley AJ, Schwartz MA, Burridge K, Firtel RA, Ginsberg MH, Borisy G, Parsons JT, Horwitz

AR. (2003) Science 302, 1704-9.

2. Horwitz R, Webb D. (2003) Curr Biol. 13, R756-9.

3. Lauffenburger DA, Horwitz AF. (1996) Cell 84, 359-369