磷脂酸（PA）是細(xì)胞中許多脂質(zhì)生物合成的關(guān)鍵前體。PA在膜結(jié)構(gòu)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并作為一種信號脂質(zhì)，將細(xì)胞質(zhì)蛋白招募到細(xì)胞膜上。在細(xì)胞內(nèi)，PA的濃度通過強(qiáng)效磷脂磷酸酶的活性維持在極低水平，這些酶將磷脂酸轉(zhuǎn)化為二酰基甘油（DAG）。由于DAG是另一種重要的脂質(zhì)前體，它也會迅速代謝為其他膜脂質(zhì)成分（例如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺）。最終，測量細(xì)胞中PA的含量對于監(jiān)測脂質(zhì)合成和代謝是有用的。

Cell Biolabs的總磷脂酸測定試劑盒通過偶聯(lián)酶促反應(yīng)系統(tǒng)測量樣本中的總磷脂酸含量，包括溶血磷脂酸（LPA）。首先，使用脂肪酶水解樣本中的磷脂酸生成甘油-3-磷酸。接下來，甘油-3-磷酸被甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）氧化，產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫與試劑盒中的熒光探針（激發(fā)波長530-560納米/發(fā)射波長585-595納米）發(fā)生反應(yīng)。

艾美捷總磷脂酸測定試劑盒(熒光法)（#MET-5019）是一種簡單的熒光測定法，使用96孔微孔板格式定量測量樣本中的總PA（PA和LPA）。每套試劑盒提供的試劑足以進(jìn)行多達(dá)100次測定，包括空白、標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣本。試劑盒包含L-α-磷脂酸標(biāo)準(zhǔn)品，檢測靈敏度限為約5微摩爾。注意：該試劑盒不適用于尿液、血漿或血清樣本。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. STA-397：血清甘油三酯定量試劑盒（熒光法）

2. STA-399：游離甘油測定試劑盒（熒光法）

3. STA-600：磷脂酰膽堿測定試劑盒

4. STA-619：游離脂肪酸測定試劑盒（熒光法）

5. MET-5129：賴氨酸測定試劑盒（熒光法）

試劑盒組成：

1. 磷脂酸標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號50191D）：一個200微升裝的1毫摩爾/升L-α-磷脂酸小瓶。

2. 10倍測定緩沖液（部件編號50192D）：一個1.5毫升小瓶。

3. 脂肪酶溶液（部件編號50193D）：三個1.4毫升小瓶。

4. 酶混合液（部件編號50194D）：三個1.75毫升小瓶。

5. 熒光探針（部件編號261901）：一個110微升琥珀色小瓶。

未提供的材料：

1. 標(biāo)準(zhǔn)96孔熒光黑色微孔板

2. 含鎂和鈣的PBS

3. 細(xì)胞脂質(zhì)提取試劑（甲醇、氯仿、1摩爾/升氯化鈉）

儲存條件：

將整個試劑盒儲存于-80攝氏度。通過分裝避免反復(fù)凍融。熒光探針對光敏感，應(yīng)保存在琥珀色試管中。

試劑準(zhǔn)備：

- 磷脂酸標(biāo)準(zhǔn)品：在室溫下解凍。一旦均勻混合，將標(biāo)準(zhǔn)品在室溫下保存，用于測定準(zhǔn)備。該溶液在室溫下穩(wěn)定1周。對于長期儲存，應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。

- 1倍測定緩沖液：在測定準(zhǔn)備期間，10倍測定緩沖液應(yīng)解凍并保存于4攝氏度。用去離子水稀釋10倍測定緩沖液。攪拌至均勻。1倍溶液在4攝氏度下穩(wěn)定1個月。對于長期儲存，任何未使用的10倍庫存材料應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。

- 脂肪酶溶液和酶混合液：在4攝氏度下解凍。一旦均勻混合，將溶液在測定準(zhǔn)備期間保存于4攝氏度。該溶液在4攝氏度下穩(wěn)定1周。對于長期儲存，應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。注意：這些組分提供多個試管，以減少反復(fù)凍融。

- 熒光探針：在測定準(zhǔn)備期間解凍并保存于室溫。任何未使用的材料應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。

- PEU（預(yù)平衡上層相）溶液：在玻璃容器中混合50毫升氯仿、50毫升甲醇和45毫升1摩爾/升氯化鈉。充分搖晃或混合溶液，然后讓其分離成兩相。在提取過程中使用上層相進(jìn)行洗滌。

結(jié)果示例：

下圖展示了總磷脂酸測定試劑盒的典型結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。

圖：總磷脂酸測定標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)測定協(xié)議進(jìn)行PA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。已扣除背景。

總磷脂酸測定試劑盒(熒光法)文獻(xiàn)參考：

1. Wang, X. et al. (2006) Prog. Lipid Res. 45, 250-278.

2. Merida, I. et al. (2008) Biochem. J. 409, 1-18.

3. Jenkins, G.M. and Frohman, M.A. (2005) Cell Mol. Life Sci. 62, 2305-2316.

4. Foster, D.A. and Xu, L. (2003). Mol. Cancer Res. 1, 789-800.

5. Fang, Y. et al. (2001) Science 294, 1942-1945.

6. Avila-Flores, A. et al. (2005). J. Biol. Chem. 280, 10091-10099.

7. Schmelzle, T. and Hall, M.N. (2000) Cell 103, 253-262.

8. Lim, H.K. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278, 45117-45127.