干細胞（Stem Cell）研究

無論您是研究造血、間充質(zhì)、胚胎還是神經(jīng)干細胞，Cell Biolabs提供各種工具來支持這些細胞的培養(yǎng)和表征。

1.堿性磷酸酶檢測

堿性磷酸酶（AP）是一種廣泛應用于小鼠和人胚胎干細胞（ES）和胚胎生殖細胞（EG）的標志物。Cell Biolabs的StemTAG 堿性磷酸酶試劑盒提供了一個有效的系統(tǒng)，使用AP標記來監(jiān)測細胞分化或未分化。

StemTAG 堿性磷酸酶檢測試劑盒提供試劑，通過免疫細胞化學染色或96孔板定量，比色或熒光讀數(shù)監(jiān)測堿性磷酸酶活性。

Alkaline Phosphatase Activity Assays, 96-Well

堿性磷酸酶AP活性檢測試劑盒

貨號：CBA-301

規(guī)格：100 assays

檢測方法：比色法

△測量胚胎干細胞和胚胎生殖細胞中普遍存在的堿性磷酸酶標記物

△通過比色或熒光板閱讀器定量活性

Alkaline Phosphatase Activity Assays, ICC Staining

堿性磷酸酶AP活性檢測試劑盒，ICC染色

貨號：CBA-300、CBA-306

規(guī)格：100 assays

檢測方法：ICC染色法

△測量胚胎干細胞和胚胎生殖細胞中普遍存在的堿性磷酸酶標記物

△ICC染色檢測

使用StemTAG?堿性磷酸酶染色試劑盒對未分化和分化的胚胎干細胞進行染色。小鼠胚胎干細胞（ES-D3）在LIF存在的明膠包被培養(yǎng)皿中保持未分化狀態(tài)。為了誘導分化，在幾天內(nèi)停用LIF；觀察到不同的分化事件（細胞變平、變大，增殖減少）。在第5天結(jié)束時，根據(jù)StemTAG 堿性磷酸酶染色試劑盒檢測方案對細胞進行染色。

2.造血CFC檢測

△甲基纖維素培養(yǎng)基支持造血細胞菌落的生長

△完全定量造血干細胞，無需人工細胞計數(shù)

△試驗周期7-10天，而不是3周

造血干細胞（HSC）是一種具有良好特征的組織特異性干細胞，負責造血系統(tǒng)的終身維持。造血干細胞或造血祖細胞被稱為集落形成細胞（CFC），當在合適的3D環(huán)境中培養(yǎng)時，如補充營養(yǎng)和細胞因子的甲基纖維素，會增殖形成離散的集落。

Cell Biolabs的CytoSelect 96孔造血集落形成細胞試驗可在7-10天內(nèi)促進HSC集落的形成。然后可以在熒光板讀取器中對細胞進行定量，或者從CFC檢測培養(yǎng)基中回收細胞進行進一步的下游分析。

CytoSelect 96孔造血集落形成細胞測定原理

使用CytoSelect 96孔造血集落形成細胞試驗形成集落。

3. 飼養(yǎng)細胞Feeder Cells

干細胞在培養(yǎng)基中的生長需要一定的營養(yǎng)物質(zhì)來支持細胞處于未分化狀態(tài)。諸如白血病抑制因子（LIF）之類的添加物對小鼠胚胎干細胞的培養(yǎng)起作用，但對人類胚胎干細胞可能沒有同樣的效果。在這種情況下，通常使用饋線單元層。

我們提供兩種類型的飼養(yǎng)細胞：

△MEF飼養(yǎng)細胞是小鼠胚胎纖維母細胞，多年來一直用于促進干細胞培養(yǎng)。我們的MEF細胞不是原代細胞，通常可以傳代大約6周而不會衰老。

△SNL 76/7飼養(yǎng)細胞克隆來源于小鼠成纖維細胞STO細胞系，該細胞系已轉(zhuǎn)化為新霉素抗性和小鼠LIF基因。這種永生化細胞系已被證明可作為胚胎干細胞生長的飼養(yǎng)細胞，也可用于培養(yǎng)人和小鼠的iPS細胞。

MEF Feeder Cells

△小鼠胚胎成纖維細胞允許無LIF的干細胞培養(yǎng)

△以5 × 10^6個細胞在1ml中呈現(xiàn)

△在添加ES細胞之前必須進行有絲分裂滅活

SNL 76/7 Passage-Independent Feeder Cells

△永生化細胞系來源于小鼠成纖維細胞STO細胞，轉(zhuǎn)化小鼠LIF和新霉素耐藥基因

△用于培養(yǎng)人或小鼠iPS細胞以及胚胎干細胞生長

△在添加干細胞之前必須進行有絲分裂滅活

堿性磷酸酶試劑盒常見問題：

問題1：Cell Biolabs的堿性磷酸酶試劑盒是否依賴于物種或細胞類型？

答：Cell Biolabs所有的堿性磷酸酶試劑盒可用于任何表達堿性磷酸酶的細胞類型，如成骨細胞。試劑盒不依賴于細胞類型或物種。

問題2：我用Cell Biolabs的StemTAG?堿性磷酸酶試劑盒來鑒定我的分化細胞和未分化細胞。我驚訝地發(fā)現(xiàn)，與未分化的細胞相比，我的分化細胞實際上顯示出更高水平的堿性磷酸酶。為什么會發(fā)生這種情況？

答：與干細胞相比，絕大多數(shù)成年細胞的堿性磷酸酶活性要低得多。然而，也有少數(shù)細胞，如成骨細胞，在分化后實際上表達更高水平的堿性磷酸酶。

問題3：兩種堿性磷酸酶染色試劑盒有什么區(qū)別？

答：Cell Biolabs的兩款堿性磷酸酶染色試劑盒通過免疫細胞化學染色檢測未分化細胞的AP活性，使用紅色（#CBA-300）或紫色（#CBA-306）染料。紅色染料通常比紫色染料的效果更清晰。

問題4：堿性磷酸酶染色試劑盒可以用于組織切片染色嗎？

答：是的，Cell Biolabs的染色試劑盒適用于任何具有AP活性的組織或細胞類型，只要它們沒有石蠟包埋，就可以與組織切片兼容，因為石蠟包埋會殺死活性。

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