研究目的：

目的是確定測(cè)試樣本中因子P的功能。功能性是定性地與校準(zhǔn)器（人血清）相關(guān)聯(lián)來(lái)確定的，校準(zhǔn)器被設(shè)定為100%功能性。

僅限于訓(xùn)練有素的實(shí)驗(yàn)室人員使用。結(jié)果不得用于臨床診斷或患者管理。僅限研究使用。

概述和解釋

因子P（補(bǔ)體P，適當(dāng)?shù)鞍祝現(xiàn)P）是補(bǔ)體激活替代途徑（AP）的正向調(diào)節(jié)器和啟動(dòng)因子。它結(jié)合到表面結(jié)合的C3和C5轉(zhuǎn)化酶并穩(wěn)定它們，以放大激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)1。因子P的結(jié)合使轉(zhuǎn)化酶復(fù)合體的半衰期增加約10倍2。有觀點(diǎn)（盡管存在爭(zhēng)議）認(rèn)為，因子P也可以通過結(jié)合例如細(xì)胞表面或某些生物基質(zhì)，招募C3b或C3(H2O)和因子B，從而啟動(dòng)AP途徑1,3。因子P對(duì)抗因子H的負(fù)向調(diào)節(jié)，后者增強(qiáng)C3b和Bb的解離并介導(dǎo)因子I對(duì)C3b的切割，轉(zhuǎn)化為非活性的iC3b3（圖1）。

圖1：因子P作為替代補(bǔ)體途徑的穩(wěn)定劑和啟動(dòng)因子（左），以及因子H的對(duì)立負(fù)向調(diào)節(jié)（右）。

與大多數(shù)補(bǔ)體蛋白不同，因子P不是在肝細(xì)胞中產(chǎn)生的，而是由包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和粒細(xì)胞在內(nèi)的幾種細(xì)胞類型產(chǎn)生。很可能局部刺激下因子P的短暫濃度增加會(huì)增強(qiáng)AP4。例如，中性粒細(xì)胞含有因子P的顆粒，這些顆粒在刺激下分泌，并且可以增強(qiáng)血小板-粒細(xì)胞聚集體的形成1。

在血漿中，因子P的濃度大約為4-25 ?g/mL5。因子P是一個(gè)延長(zhǎng)的53 kDa糖蛋白，在體內(nèi)以二聚體、三聚體或四聚體（P2、P3和P4）的形式寡聚，比例為26:54:20（P2:P3:P4），形成頭對(duì)尾結(jié)構(gòu)5,6。寡聚狀態(tài)與C3轉(zhuǎn)化酶穩(wěn)定功能相關(guān)，寡聚體的分布影響因子P的整體功能性7。

突變、缺乏、蛋白水平以及因子P的蛋白沉積與疾病和障礙有關(guān)，由Chen等人總結(jié)3。缺乏通常增加對(duì)腦膜炎球菌病和其他傳染病的易感性8。改變的血清水平已與例如C3腎小球病、狼瘡性腎炎、敗血癥和慢性心力衰竭以及IgA腎病相關(guān)聯(lián)9。

艾美捷補(bǔ)體P因子功能檢測(cè)試劑盒（Complement Factor P Functional assay）（#COMPL FPF RUO）的測(cè)定原理：

因子P功能測(cè)定是一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）將功能性補(bǔ)體活性測(cè)定的原理與標(biāo)記的使用相結(jié)合對(duì)沉積的補(bǔ)體蛋白具有特異性的抗體。已存入的補(bǔ)充金額蛋白質(zhì)與樣品中因子P的功能活性成正比。

補(bǔ)體P因子功能檢測(cè)試劑盒組成：

一個(gè)帶有微孔板（12x8）的框架，孔內(nèi)涂有抗因子P單克隆抗體，用鋁箔包裝，并附有干燥劑包。

1.5毫升陰性對(duì)照（NC），綠色，綠色瓶蓋。即用型。

3.0毫升校準(zhǔn)器，200納克/毫升。即用型。

32毫升稀釋液（Dil），紅色。即用型。

30毫升洗滌溶液，30倍濃縮。

活化劑，凍干型。

15毫升活化劑稀釋液。即用型。

3.0毫升猝滅液。即用型。

7.5毫升結(jié)合物含有針對(duì)C3b的HRP標(biāo)記抗體，藍(lán)色，棕色瓶。即用型。

15毫升底物TMB，棕色瓶。即用型。

15毫升終止液（0.5M H2SO4）。即用型。

需要但未提供的物料或設(shè)備：

帶有450納米和620納米濾光片的酶標(biāo)儀

軌道搖床（200轉(zhuǎn)/分鐘）

帶一次性吸頭的精密移液管

96孔板或條的密封膜

96孔板或條的洗滌器

吸水紙

試劑和樣品稀釋用的容器

冰或相應(yīng)的板冷卻設(shè)備

計(jì)時(shí)器

穩(wěn)定性和儲(chǔ)存：

所有試劑應(yīng)儲(chǔ)存在2-8°C，活化劑除外。在2-8°C下儲(chǔ)存時(shí)，稀釋后的洗滌液有效期至套件的有效期。

凍干活化劑應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C或更低溫度。復(fù)溶后的活化劑可以在-70°C下冷凍，并且只能解凍一次。

標(biāo)本收集和準(zhǔn)備：

應(yīng)使用無(wú)菌靜脈穿刺技術(shù)收集全血樣本，并使用標(biāo)準(zhǔn)程序獲得血清或EDTA血漿。建議每個(gè)樣本至少抽取5毫升全血。離心血樣并將無(wú)細(xì)胞血清或血漿轉(zhuǎn)移到干凈的試管中。

離心后的血清或EDTA血漿可保存在4°C。較長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，血清和血漿樣本應(yīng)冷凍在-20°C或更低溫度。建議在分析前不要將測(cè)試樣本凍融超過兩次。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定測(cè)試樣本儲(chǔ)存條件的可接受性，因?yàn)檫@可能因預(yù)分析因素而異。

在進(jìn)行補(bǔ)體P功能性分析之前，確定每個(gè)測(cè)試樣本中因子P的濃度。對(duì)于這種因子P濃度的測(cè)定，可以使用Svar Life Sciences AB提供的因子P定量分析。

補(bǔ)體P因子功能檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Moore, S. R.; Menon, S. S.; Galwankar, N. S.; Khuder, S. A.; Pangburn, M. K.; Ferreira, V. P. A Novel Assay That Characterizes Properdin Function Shows Neutrophil-Derived Properdin Has a Distinct Oligomeric Distribution. Frontiers in Immunology 2023, 13.

(8) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(9) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.