研究目的：

目的是定量測(cè)試樣本中人類(lèi)因子P的含量。該產(chǎn)品僅供經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)室人員使用。不得使用結(jié)果用于臨床診斷或患者管理。僅供研究使用。

艾美捷補(bǔ)體P因子定量檢測(cè)試劑盒（Complement Factor P Quantitative assay）（#COMPL FPQ RUO）的測(cè)定原理：

補(bǔ)體因子P定量分析是一種夾心ELISA，用于定量分析例如血清或血漿樣本中的人體因子P。該分析基于96孔板中固定的抗體，捕獲在板中孵化的測(cè)試樣本中的因子P。用HRP標(biāo)記的二級(jí)抗體檢測(cè)結(jié)合的因子P。隨后HRP催化底物的切割，引起顏色變化，與測(cè)試樣本中因子P的濃度相關(guān)。

需要但未提供的物料或設(shè)備：

帶有450納米和620納米濾光片的酶標(biāo)儀

軌道搖床（除非包含在酶標(biāo)儀的功能中）

帶一次性吸頭的精密移液管

96孔板或條的洗滌器

吸水紙

試劑和樣品稀釋用的容器

計(jì)時(shí)器

穩(wěn)定性和儲(chǔ)存：

試劑應(yīng)儲(chǔ)存在2-8°C。在2-8°C下儲(chǔ)存時(shí)，稀釋后的洗滌液有效期至套件的有效期。

標(biāo)本收集和準(zhǔn)備：

應(yīng)使用無(wú)菌靜脈穿刺技術(shù)收集全血樣本，并使用標(biāo)準(zhǔn)程序獲得血清或EDTA血漿。建議每個(gè)樣本至少抽取5毫升全血。離心血樣并將無(wú)細(xì)胞血清或血漿轉(zhuǎn)移到干凈的試管中。

離心后的血清或EDTA血漿可保存在4°C。較長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，血清和血漿樣本應(yīng)冷凍在-20°C或更低溫度。建議在分析前不要將測(cè)試樣本凍融超過(guò)兩次。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定測(cè)試樣本儲(chǔ)存條件的可接受性，因?yàn)檫@可能因預(yù)分析因素而異。

結(jié)果評(píng)估：

對(duì)于每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，從450納米波長(zhǎng)減去620納米參考波長(zhǎng)，并計(jì)算所有重復(fù)樣本的平均吸光度值。

通過(guò)繪制六種校準(zhǔn)器的吸光度與濃度（0 ng/ml、12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和200 ng/ml）構(gòu)建校準(zhǔn)曲線(xiàn)。

在這個(gè)應(yīng)用說(shuō)明的例子中（圖2），使用了4參數(shù)曲線(xiàn)擬合，但用戶(hù)可以選擇不同的曲線(xiàn)擬合。根據(jù)校準(zhǔn)曲線(xiàn)讀取未知樣本的濃度。

注意：要計(jì)算樣本中因子P的濃度，必須根據(jù)上述協(xié)議進(jìn)行稀釋補(bǔ)償，即200倍。如果選擇了不同的樣本稀釋?zhuān)瑧?yīng)相應(yīng)地進(jìn)行補(bǔ)償。

補(bǔ)體P因子定量檢測(cè)試劑盒校準(zhǔn)曲線(xiàn)示例：

請(qǐng)注意：上圖顯示了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的示例，不應(yīng)用于實(shí)際樣品解釋。

補(bǔ)體P因子定量檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(8) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.