Wieslab補體系統(tǒng)替代途徑試劑盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）是一種酶免疫測定法，用于定性測定人血清中功能性替代補體途徑。僅供體外診斷使用。

概述和解釋：

補體系統(tǒng)在慢性、自身免疫和感染性疾病中發(fā)揮著重要作用。補體激活有三個途徑（圖1），即經(jīng)典途徑、替代途徑和最近發(fā)現(xiàn)的MBL途徑。

補體活性受損會導(dǎo)致人類易患重復(fù)性暴發(fā)性或嚴重感染，并可能促進自身免疫疾病的發(fā)展。補體的不適當激活會導(dǎo)致慢性炎癥和組織損傷。

艾美捷Wieslab補體系統(tǒng)替代途徑試劑盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）（#COMPLAP330）的測定原理：

Wieslab 補體測定結(jié)合了補體激活的溶血測定原理和使用特定于補體激活產(chǎn)生的新抗原的標記抗體。產(chǎn)生的新抗原量與補體途徑的功能活性成正比。

在補體系統(tǒng)AP試劑盒中，微孔板條的孔被特定的替代途徑激活劑包被。患者血清在含有特定阻斷劑的稀釋液中稀釋，以確保只有替代途徑被激活。在孔中孵育稀釋的患者血清期間，補體通過特定包被被激活。

然后洗滌孔，并使用特定的堿性磷酸酶標記抗體檢測在MAC形成期間表達的新抗原的C5b-9。

在進一步洗滌步驟后，通過與堿性磷酸酶底物溶液孵育獲得特定抗體的檢測。補體激活量與顏色強度相關(guān)，并以吸光度（光密度（OD））來衡量。

試劑盒組件和試劑儲存：

一個框架，帶有無色分離孔（12x8），密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中。孔被LPS包被。

35毫升AP稀釋液（Dil AP），標為紅色。

13毫升含有堿性磷酸酶標記的C5b-9抗體的結(jié)合物（藍色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍濃縮的洗滌溶液。

0.2毫升陰性對照（NC），含有人血清。（應(yīng)按患者血清樣本稀釋）。

0.2毫升陽性對照（PC），含有凍干人血清，見下文“陽性對照的重組”。

試劑盒中的所有試劑都已準備好使用，除了洗滌溶液和對照品。試劑應(yīng)儲存在2-8°C，除了陽性對照。陽性對照必須儲存在-20°C。

所需但未提供的物料或設(shè)備：

帶有405納米濾光片的微孔板讀取器。

帶有一次性吸頭的精密移液器。

用于條帶的清洗器、吸水紙、管子和一個計時器。

操作程序：

僅取出所需數(shù)量的孔，小心重新密封鋁箔包裝。在分析前讓所有溶液平衡至室溫（20-25°C）。

洗滌溶液的準備

如果濃縮洗滌溶液瓶中觀察到鹽晶體，將瓶子置于37°C水浴中直到晶體溶解，然后再稀釋洗滌溶液。將30毫升30倍濃縮洗滌溶液稀釋在870毫升蒸餾水中。當儲存在2-8°C時，稀釋后的洗滌溶液穩(wěn)定直到試劑盒的有效期。

陽性對照的重組：

輕輕敲擊所有凍干物料至瓶底并取下蓋子。立即向凍干物料中加入200微升蒸餾水。重新蓋上蓋子。讓瓶子在冰上放置5分鐘，然后輕輕搖晃或偶爾渦旋直到完全溶解。按患者血清樣本的方式稀釋重組對照品。重組對照品如果保持在2-8°C或冰上，可在使用前儲存長達4小時。它可以在-70°C下冷凍并解凍一次。

血清：

通過在37°C水浴中短暫放置并輕輕混合，部分解凍冷凍血清。部分解凍后，立即將管子放入冰浴中，并在冰上放置直到完全解凍。在渦旋混合器上短暫混合。

血清稀釋：

用AP稀釋液（紅色標簽）按1/18的比例稀釋血清（340微升稀釋液+20微升血清）。稀釋后的血清在分析前可以放置在室溫下最多60分鐘。

樣品孵育：

根據(jù)圖示，每個途徑按重復(fù)孔加入100微升的空白（Dil AP）、陽性對照（PC）、陰性對照（NC）和稀釋的患者血清（P）。在+37?C下孵育60-70分鐘。

預(yù)期結(jié)果：

體外補體序列的激活導(dǎo)致補體成分的消耗，這反過來導(dǎo)致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統(tǒng)是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，使用功能性和免疫化學(xué)補體測量來評估患者。通過功能性測定（如Wieslab 補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學(xué)方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。當發(fā)現(xiàn)補體成分或補體功能水平降低時，臨床醫(yī)生會考慮缺陷或正在進行的免疫過程，導(dǎo)致成分分解增加和補體水平降低。補體水平的增加通常是急性期反應(yīng)的非特異性表現(xiàn)。

Wieslab 補體系統(tǒng)AP可以幫助檢測與替代途徑相關(guān)的補體缺陷，如下表所示：使用Wieslab 補體系統(tǒng)篩選，可以更完整和深入地功能性評估所有三個補體途徑。

WIESLAB補體系統(tǒng)替代途徑文獻參考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al., Functional characterization of the lectin pathway of

complement in human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sj?holm A. New procedure for detection of complement

deficiency by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

M.A. Seelen et al, Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the

complement system: standardization and validation of a simple ELISA. J Imm Meth 2005,

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