細胞衰老是指細胞停止分裂的現(xiàn)象。

細胞衰老可以由內(nèi)部因素（氧化應(yīng)激、DNA損傷等）和外部因素（毒素、紫外線等）誘導。衰老是一種細胞生長停滯的狀態(tài)，細胞保持活性但不再分裂。衰老細胞表現(xiàn)出細胞體積增大、衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（β-Gal）表達增加、p53和p16活性增強，以及基因表達模式的改變。AkrivisBio的衰老檢測試劑盒旨在檢測β-Gal活性。β-Gal主要存在于衰老細胞中，但在正常表達β-Gal的細胞（如成熟巨噬細胞）中可能會出現(xiàn)假陽性。

艾美捷細胞衰老染色試劑盒：

貨號：COS-0102

規(guī)格：可用于染色4片24孔、12孔或6孔培養(yǎng)板

樣本類型：培養(yǎng)的貼壁細胞

適用物種：所有

檢測方法：光學顯微鏡

檢測類型：定性檢測

應(yīng)用：用于在光學顯微鏡下檢測衰老細胞中的β-半乳糖苷酶（β-Gal）活性。

儲存條件：4°C

運輸溫度：冰凝膠包運輸

保質(zhì)期：自發(fā)貨之日起一年

檢測原理：

1.細胞被固定以使其變得通透。

2.細胞經(jīng)過一夜染色，以便在顯微鏡下觀察到藍色。

檢測試劑：

-固定液：125毫升

-X-gal（150毫克）：凍干粉，綠色試劑瓶

-染色液：125毫升

-染色補充液：1.5毫升

用戶自備材料：

-N,N-二甲基甲酰胺（DMF）

-磷酸鹽緩沖液（PBS）

儲存和處理：

-將試劑盒儲存于-20°C。溶解X-gal后，將溶液儲存于-20°C并避光。

-以下協(xié)議是為12孔板的每個孔設(shè)計的。如果使用不同規(guī)格的孔板，請相應(yīng)調(diào)整體積（例如，對于6孔板，體積加倍；對于24孔板，體積減半）。

-準備PBS溶液（未提供），每孔3毫升。

-X-gal溶液：X-gal具有吸濕性。在打開瓶蓋前，讓其在室溫下平衡30分鐘。稱取20毫克X-gal放入棕色或用鋁箔包裹的試管中，加入1毫升N,N-二甲基甲酰胺，制備20倍濃縮液。未使用的X-gal溶液可在-20°C（避光）下儲存1-2個月。始終使用聚丙烯或玻璃容器存放X-gal溶液，不要使用聚苯乙烯。

-固定液、染色液和染色補充液（100倍濃縮）可在4°C下儲存。

-如果染色液或染色補充液中出現(xiàn)沉淀，將溶液加熱至37°C以重新溶解沉淀。如果沉淀仍然存在，離心試管并使用上清液。

衰老檢測步驟：

1.通過在孔邊緣吸液移除培養(yǎng)基，用1毫升PBS洗滌細胞一次。

2.用0.5毫升固定液在室溫下固定細胞10-15分鐘。在細胞固定的同時準備染色液。根據(jù)要染色的孔數(shù)準備足夠的溶液。對于每個孔，準備以下溶液：

-染色液：470微升

-染色補充液：5微升

-X-gal在DMF中的溶液：25微升

3.用1毫升PBS洗滌細胞兩次。

4.向每個孔中加入0.5毫升染色液混合物。蓋上孔板。在37°C下孵育過夜。

5.在顯微鏡下觀察細胞藍色的出現(xiàn)（放大倍數(shù)為40-400倍）。

6.對于長期保存染色后的孔板，移除染色液并加入70%甘油至細胞中。在4°C下保存。

示例：

X-gal染色的典型結(jié)果。  

出處：Tominaga, T., Shimada, R., Okada, Y., Kawamata, T., & Kibayashi, K. (2019). 鼠腦創(chuàng)傷后大腦中衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色。《PLOS ONE》，14(3)，e0213673。doi:10.1371/journal.pone.0213673