一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本ELISA入門配件試劑盒（含BSA封閉緩沖液）（貨號：E101）為酶聯(lián)免疫吸附測定實驗提供全套基礎(chǔ)試劑與耗材，包含高質(zhì)量微孔板、包被緩沖液、洗滌液、封閉液、表面活性劑及HRP酶底物。所有組件均經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計，適用于建立或優(yōu)化間接ELISA、夾心ELISA及競爭ELISA等多種檢測體系。本套裝覆蓋ELISA實驗從抗原包被到信號檢測的全流程，用戶僅需準(zhǔn)備待測樣本、一抗及酶標(biāo)二抗即可開展實驗。

二、組件清單與詳細(xì)規(guī)格

組件名稱 | 規(guī)格 | 貨號/來源 | 存儲條件 | 保質(zhì)期

微孔板（帶框架） | 10 × 96孔板 | Nunc 445101 | 室溫，防塵防潮 | 1年

ELISA包被緩沖液 | 2膠囊 | Sigma C3041 | 室溫 | 1年

ELISA洗滌液 | 5包 | Sigma T9039 | 2-30°C | 1年

ELISA封閉緩沖液 | 1包 | Sigma T6789 | 2-8°C | 1年

10% Tween 20 | 1瓶 | Sigma P7949 | 室溫 | 1年 |

TMB底物液 | 2 × 60 ml | — | 2-8°C | 1年

三、各組件的功能與使用說明

3.1 微孔板（Microtiter Wells）

產(chǎn)品信息：Nunc MaxiSorp C形底模塊與框架，貨號445101，共10塊96孔板。MaxiSorp表面經(jīng)專有處理，具有高親水性及高蛋白結(jié)合能力，適用于被動吸附抗原或抗體。

使用要點：

C形底（平底）設(shè)計便于比色讀數(shù)，尤其適合酶標(biāo)儀檢測。

每孔結(jié)合容量約為400-500 ng IgG（取決于蛋白性質(zhì)）。

拆開包裝后未使用的板條應(yīng)密封保存，避免吸濕。

建議在包被前用無水乙醇或異丙醇清潔表面（非必需步驟）。

存儲條件：室溫存放，避免灰塵和碎屑污染。請勿暴露于高溫或潮濕環(huán)境。

3.2 ELISA包被緩沖液（Coating Buffer）

產(chǎn)品信息：碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液膠囊（Sigma C3041），每包2粒。每粒膠囊配制100 ml緩沖液，終濃度為0.05 M碳酸鹽-碳酸氫鹽，pH 9.6。該pH范圍適用于多數(shù)蛋白質(zhì)（如抗體、抗原）的被動吸附。

配制方法：將一粒膠囊內(nèi)容物溶于100 ml去離子水或蒸餾水中，攪拌至完全溶解。無需調(diào)節(jié)pH。

使用提示：

包被條件：推薦每孔加入50-100 ?l稀釋于包被緩沖液中的抗原或抗體，4°C孵育過夜或37°C孵育1-2小時。

包被后需用洗滌液洗板3-5次，再進行封閉步驟。

未使用完的包被液可短期保存于2-8°C（建議1周內(nèi)使用），但推薦新鮮配制。

3.3 ELISA洗滌液（Wash Solution）

產(chǎn)品信息：50 mM Tris緩沖鹽水，pH 8.0，含0.05% Tween 20（Sigma T9039），每包可配制1升工作液。Tris緩沖體系提供穩(wěn)定的pH環(huán)境，Tween 20作為非離子型表面活性劑可有效降低非特異性吸附。

配制方法：將一包內(nèi)容物溶于900 ml去離子水，攪拌溶解后定容至1升。無需調(diào)節(jié)pH。

存儲條件：配制后的工作液可在2-30°C保存一年，但建議室溫（20-25°C）存放以避免低溫沉淀。

使用提示：

每孔洗滌量推薦300 ?l，每次洗滌靜置30-60秒后拍干。

重復(fù)洗滌3-5次可有效去除未結(jié)合物質(zhì)。

若發(fā)現(xiàn)洗滌液有沉淀，可輕微加熱（不超過37°C）溶解后使用。

3.4 ELISA封閉緩沖液（Blocking Buffer）

產(chǎn)品信息：50 mM Tris緩沖鹽水，pH 8.0，含1%牛血清白蛋白（BSA）（Sigma T6789），每包配制100 ml工作液。BSA可封閉微孔板上未被包被蛋白占據(jù)的空白位點，減少后續(xù)抗體的非特異性吸附。

配制方法：將一包內(nèi)容物溶于90 ml去離子水，攪拌溶解后定容至100 ml。可輕微加熱（37°C）輔助溶解。建議無菌過濾（0.22 ?m濾膜）后使用。

存儲條件：配制后應(yīng)保存于2-8°C，保質(zhì)期一年。請勿反復(fù)室溫放置。

使用提示：

每孔加入200-300 ?l封閉液，室溫孵育1小時或4°C過夜。

封閉后無需洗滌，直接加入一抗或檢測抗體。

若檢測系統(tǒng)對BSA敏感（如某些抗BSA抗體），可改用脫脂牛奶或其他封閉劑。

3.5 10% Tween 20溶液

產(chǎn)品信息：10%聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯（Tween 20）水溶液（Sigma P7949）。Tween 20是ELISA洗滌緩沖液中的關(guān)鍵去污劑，可降低背景信號。

使用提示：

用于配制含Tween 20的洗滌緩沖液或抗體稀釋液。常見工作濃度為0.05%（即每升緩沖液加入5 ml 10% Tween 20）。

也可直接加入樣本稀釋液中，減少非特異性吸附。

原液若出現(xiàn)絮狀物或沉淀，可輕微加熱（不超過40°C）并搖勻后使用。

存儲條件：室溫保存，避免凍結(jié)。有效期一年。

3.6 TMB酶底物（Enzyme Substrate）

產(chǎn)品信息：TMB（四甲基聯(lián)苯胺）單組分HRP微孔底物液，共2瓶，每瓶60 ml。即開即用，無需稀釋或混合。TMB在辣根過氧化物酶（HRP）催化下產(chǎn)生藍色可溶性產(chǎn)物（λmax = 370 nm或652 nm），加酸終止后變黃（λmax = 450 nm），是最常用的HRP顯色底物之一。

使用提示：

使用前將底物平衡至室溫（避免冷底物導(dǎo)致反應(yīng)速率不均）。

每孔加入50-100 ?l底物，室溫避光孵育5-30分鐘（根據(jù)信號強度優(yōu)化時間）。

顯色充分后，每孔加入50 ?l終止液（如2 M H?SO?或1 M HCl），輕輕混勻后讀取OD 450 nm。

請勿使用金屬器具接觸底物，避免氧化污染。

存儲條件：嚴(yán)格保存于2-8°C，避免光照。未開封可保存一年，開封后建議在1個月內(nèi)用完，或分裝后冷凍保存（-20°C）。若底物出現(xiàn)藍色或深藍色，表明已氧化失效，請勿使用。

四、注意事項與質(zhì)量控制

1. 交叉污染預(yù)防：各組件應(yīng)獨立存放，使用潔凈移液器及吸頭。Tween 20易起泡，加液時避免產(chǎn)生過多氣泡。

2. 內(nèi)源性酶干擾：若樣本中含有內(nèi)源性過氧化物酶（如血液樣本），可在樣本稀釋液中加入0.1%疊氮化鈉或0.01%過氧化氫酶抑制劑，但需注意疊氮化鈉會抑制HRP，不可在底物反應(yīng)前使用。

3. 底物安全：TMB潛在致癌性，操作時應(yīng)戴手套，避免皮膚接觸。

4. 板子保存：包被封閉后的微孔板可干燥密封保存于2-8°C 1-2周，但建議新鮮使用以獲得最佳靈敏度。

5. 緩沖液pH：包被緩沖液pH 9.6適用于大多數(shù)蛋白，若蛋白等電點極低（pI <5），可改用中性或弱酸性包被緩沖液（如PBS，pH 7.4）。