溶血磷脂酸（LPA）測定試劑盒II：高靈敏、特異性強、穩定性強

Lysophosphatidic Acid (LPA) Assay Kit II  (貨號EEB-K-2800S） 是一種高靈敏、特異性強、穩定性強的用于定量血漿、血清和組織勻漿中的LPA的試劑盒。

樣品類型: 血清、血漿和組織勻漿(人或動物)

樣品體積: 20?L/樣品(重復點)

實驗孵育時間: 2小時30分鐘

檢測范圍: 0.064?M~1000?M

LPA是一種血清來源的磷脂，參與多種細胞過程，如細胞增殖、趨化性、血小板聚集、傷口愈合、血管生成、腫瘤侵襲和平滑肌收縮。近年來的研究表明，LPA可能在癌癥的病理生理中發揮重要作用，并可能作為卵巢癌的生物標志物。

溶血磷脂酸(LPA)測定是一種設計用于體外測定生物樣品中溶血磷脂酸(LPA)的酶聯免疫吸附試驗。LPA檢測對LPA具有特異性，對不同的酰基鏈敏感。該分析是一種競爭性ELISA，其中比色信號與樣品中存在的LPA的量成反比。本質上，隨著LPA在測定中量的增加，比色信號減少。簡單地說，科學家將他們的樣品與生物素化的抗lpa抗體和樣品稀釋劑混合。然后他們將混合物轉移到LPA涂層檢測板上進行競爭結合。鏈親和素hrp和比色檢測用于檢測結合到板上的生物素化抗lpa的量。使用已知LPA量的標準曲線來確定樣品中LPA的濃度。LPA測定在450nm處讀取，需要3小時運行。

在本文中，我們將介紹溶血磷脂酸(LPA)檢測試劑盒II的特異性數據。該ELISA檢測是與Lpath(最初的抗體開發商)合作開發驗證，將用于檢測其對其他類似或豐富的脂質(如磷脂酸(PA)和溶血磷脂酰膽堿(LPC))的特異性，我們將展示它如何區分各種LPA物種。

LPA分析的重要參與者

Lysophosphatidic Acid(LPA)

LPA是一種血清衍生的生物活性磷脂，參與多種細胞過程，如細胞增殖、趨化性、血小板聚集、傷口愈合、血管生成、腫瘤侵襲和平滑肌收縮。最近的研究表明，LPA可能在癌癥的發展中起著至關重要的作用，并可能作為卵巢癌的有用生物標志物。根據一項利用LPA測定法的初步研究，LPA水平在子宮內膜樣卵巢癌患者中明顯較高。測量陰道分泌物中的LPA可能為絕經后婦女診斷子宮內膜樣卵巢癌提供一種無創方法。

Lysophosphatidic (LPA) Antibody

LPA Antibody 是一種專門針對LPA的新型單克隆抗體。LPA抗體最初由Lpath獲得專利并開發，旨在抑制LPA在體外和體內的作用。如本文所述，LPA抗體在競爭性ELISA檢測中表現出特異性。一項利用KinExA (Kinetic Exclusion Assays)進行的研究證實，LPA抗體與所有相關LPA物種，特別是16:0和18:2 LPA具有高親和力。此外，他們發現LPA抗體可以減少創傷性腦損傷后的病變體積和擴散，表明其具有中和炎性脂質LPA的潛力，并支持其作為LPA靶向治療藥物的使用。

Lysophosphatidic (LPA) Assay

LPA Assay是一種具有競爭力的ELISA，用于測量復雜樣品(如血清、血漿和組織勻漿)中的LPA水平。競爭性ELISA也稱為抑制試驗，通過評估分析物如何干擾分析信號來確定分析物濃度。該格式對于檢測復雜混合物(包括血漿、血清或細胞提取物)中的小分析物(如脂質)特別有效，只需最少的樣品處理。競爭性ELISA對樣品稀釋和基質效應不太敏感，并且通常在測定之間表現出較低的變化，使其成為我們許多ELISA測定的首選。

在這個實驗中，含有LPA的樣品與LPA抗體在樣品稀釋液中孵育。然后將得到的混合物涂在lpa涂層的檢測板上進行競爭結合。檢測采用HRP和比色法測量結合到板上的LPA抗體的量。LPA濃度是用已知LPA量的標準曲線確定的。該分析在450nm處讀取，大約需要3小時才能完成。完整的協議可以在這里找到。

LPA檢測對不同LPA酰基鏈的特異性

LPA的長度和酰基鏈的飽和度不同。這些差異包括鏈上的碳數(16-、18-或20-)以及脂肪酸是飽和的還是不飽和的。例如，16:0和18:0是飽和脂肪酸，而16:1、18:1、18:2和20:4是不飽和脂肪酸。人血清中最常見的LPA種類是18:1-LPA(油酸)、18:2-LPA(亞油酸)和20:4-LPA(花生四烯酸)。根據兩份出版物(Murph2007和Sutphen2004)， LPA在人血漿中的存在比例為C16:0: C18:0: C18:1: C18:2: C20:4 = 2.8:1.0:1.5:2.6:3.0。基于這些數據，我們分別測試了一個“混合LPA”和每個LPA，如下表1所示。在這個實驗中，我們運行了完整的競爭曲線，并通過IC50值進行了比較。

Table 1: LPA Assay LPA acyl chain specificity

LPA酰基鏈特異性結果如下: 

1. LPA測定采用LPA C18:3作為測定標準；

2. LPA測定識別以下LPA種類(從高到低的順序):C18:3 > C18:2 >混合型LPA > C20:4 > C18:1 > C16:0 > C18:0；

3. 混合LPA =存在于人血漿中的LPA種類(C16:0: C18:0: C18:1: C18:2: C20:4 = 2.8:1.0:1.5:2.6:3.0)；

LPA檢測對其他脂質的特異性

上文描述了利用LPA抗體的競爭性分析，他們的競爭性ELISA對LPA是特異性的，不結合其他測試的脂質(表1)。他們的結果反映了我們的內部測試，并與Lpath使用可比較的競爭性ELISA方法的結果一致。

表2給出了在200 μM的LPA實驗中測試的一組脂質，測試標準為LPA 18:3。結果顯示極少或無交叉反應性。除了已發表的數據和我們測試的脂質外，Lpath測試的更廣泛的脂質面板(未顯示)顯示出類似的最小交叉反應性。基本上，當在競爭性ELISA格式中使用時，LPA抗體對其靶脂質LPA表現出高特異性。

Table 2: LPA Assay lipid cross reactivity

數據表明，LPA分析法與我們所測試的脂質具有<1%的交叉反應性。如果對某一特定脂質有顧慮，此處未顯示的其他測試數據可應要求共享。

綜上所述，Echelon的LPA Assay對于檢測LPA具有高度特異性，LPA是一種具有潛在癌癥生物標志物應用價值的關鍵脂質。該方法的廣泛驗證表明，它可以有效地區分LPA與類似的脂質，確保在復雜樣品中準確測量LPA。該檢測的高特異性和低交叉反應性使其成為研究和臨床應用的可靠工具。

原文鏈接：https://www.echelon-inc.com/how-specific-is-the-lpa-assay-kit-ii/?mc_cid=93d09d3c99&mc_eid=1618568324