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駱駝外周血單核細胞(PBMC)分離試劑盒是一種即用型試劑盒,含有無菌稀釋緩沖液、密度培養(yǎng)基和密度墊,用于從包括駱駝、羊駝在內(nèi)的各種駱駝家族成員的全血中分離PBMC細胞。
利用細胞密度的差異將粒細胞和紅細胞從外周血中分離出來血液單核細胞(PBMCs)。分離外周血單個核細胞常見的技術(shù)是混合血液使用一種能夠聚集紅細胞的化合物,從而提高其沉降速率。這個SepOBuffer?中的活性成分是泛影酸鈉和具有滲透壓的多糖290+15 mOsm/L,密度1.077+0.001 g/ml。SepOBuffer?中的多糖可增強離心過程中紅細胞聚集增加紅細胞沉降。PBMCs較低密度保留在血漿SepOBuffer?界面中,可以從當紅細胞沉淀時,試管。全血中的PBMCs可以可靠、快速地使用SepOBuffer?以純形式分離。
艾美捷FabGennix-PBMC分離試劑盒|駱駝科(FGI-PBMC1930)組成:
PBMC SepOBufferTM 150 mL
PBMC Dilution Buffer 250 mL
RBC Lysis Buffer 50 mL
PBMC separation tubes with medium grit frit 10 tubes
協(xié)議:
1. 高密度淋巴細胞分離液,SepOBuffer?(貨號 # FGI-1930)在使用前必須達到室溫。
2. 將SepOBuffer?加入到含有熔合介質(zhì)磨砂濾網(wǎng)的無菌試管中(目錄號 # FGI-1933-01)。
推薦體積和管道尺寸:

3. 全血達到室溫后,用PBMC稀釋液(貨號 # FGI-1931)進行稀釋。
4. 將稀釋后的血液分層放入含有SepOBuffer?的試管中。注意不要將稀釋后的血液與SepOBuffer?混合。
5. 在不使用剎車的外掛式桶裝轉(zhuǎn)子離心機中,以850x G的速度離心20分鐘,溫度設(shè)定為250C。如果血液存放超過兩小時,則將離心時間增加到30分鐘。
6. 丟棄上層血漿層,并收集位于血漿-SepOBuffer?界面含有PBMCs的薄層。
7. PBMCs在外掛式桶裝轉(zhuǎn)子離心機中以1500RPM的速度在4oC下離心10分鐘形成細胞沉淀。
8. 將細胞沉淀通過在PBMC稀釋液(貨號 # FGI-1931)中重新懸浮來洗滌,并在4oC下以1500 RPM的速度在外掛式桶裝轉(zhuǎn)子離心機中離心10分鐘。
9. 丟棄上清液,PBMCs部分中的紅細胞污染通常在1-5%之間,這可以通過使用裂解緩沖液(貨號 # FGI-1932)來消除,如下所述。
10. 細胞沉淀在5ml的裂解緩沖液(FGI-1932)中重新懸浮,并在室溫下孵育5分鐘。孵育后,用4oC的PBMC稀釋液補充試管至頂部,并在4oC下以1500 RPM的速度在外掛式桶裝轉(zhuǎn)子離心機中離心10分鐘。
12. 丟棄上清液,并保留富含PBMCs的細胞沉淀。
13. 細胞沉淀在PBMC稀釋液中重新懸浮,分裝到冷凍管中,并存儲在液氮中。
本產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人類或臨床診斷。
艾美捷科技是FabGennix的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
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