FuGENE HD 是一種100%合成的、多組分的、非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，專為將 DNA 傳遞到更具挑戰(zhàn)性的真核細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞系而設(shè)計(jì)。FuGENE HD 與核酸和細(xì)胞膜相互作用，以提供高效且安全地進(jìn)入細(xì)胞的方式。這種機(jī)制使用戶能夠克服難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中的障礙，例如原代細(xì)胞、干細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，并且已成功用于轉(zhuǎn)染超過(guò)1000種細(xì)胞系。憑借直接且快速的方案，F(xiàn)uGENE HD 允許研究人員和科學(xué)家釋放寶貴的實(shí)驗(yàn)室時(shí)間。

艾美捷FuGENE HD DNA轉(zhuǎn)染試劑（#HD-1000）用于真核細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞的瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞，需要轉(zhuǎn)染試劑具有高效轉(zhuǎn)染和細(xì)胞毒性極低的特質(zhì)。

FuGENE可提供FuGENE 6、FuGENEHD和FuGENE 4K三種DNA轉(zhuǎn)染試劑，以滿足研究人員的不同需求。FuGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑適用于無(wú)論是常規(guī)的高性價(jià)比轉(zhuǎn)染，還是敏感的，難轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞或干細(xì)胞。其實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單、省時(shí)，在無(wú)血清或含血清培養(yǎng)基中均可轉(zhuǎn)染。可滿足科學(xué)研究和生產(chǎn)抗體、蛋白質(zhì)及病毒的需求。

FuGENE HD試劑：DNA復(fù)合物的制備和細(xì)胞轉(zhuǎn)染

貼壁細(xì)胞和35毫米培養(yǎng)皿中的懸浮細(xì)胞

對(duì)于初步優(yōu)化，使用FuGENE HD試劑：DNA比例分別為1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1和4:1（微升FuGENE HD試劑對(duì)應(yīng)微克DNA）來(lái)準(zhǔn)備復(fù)合物，下面描述的是為單個(gè)六孔板孔或35毫米培養(yǎng)皿準(zhǔn)備復(fù)合物的方法。這些比例對(duì)于常用的貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞通常效果很好。

重要提示：即使在有血清的情況下轉(zhuǎn)染細(xì)胞，F(xiàn)uGENE HD試劑：DNA復(fù)合物也必須在不含血清的培養(yǎng)基中制備。

比率概述：

制備足以用于35mm培養(yǎng)皿、六孔板中的一孔或二十個(gè)96孔板孔的復(fù)合體，比率為4：

如何使用FuGENE HD DNA轉(zhuǎn)染試劑？

1.) 在使用前讓FuGENE HD轉(zhuǎn)染試劑、DNA和稀釋液調(diào)整至室溫。渦旋混合一秒，或倒置FuGENE HD轉(zhuǎn)染試劑瓶以混合。

2.) 在無(wú)血清培養(yǎng)基（無(wú)抗生素或殺真菌劑）中稀釋DNA：

標(biāo)記六個(gè)小的無(wú)菌管：“1.5:1, 2:1, 2.5:1, 3:1, 3.5:1 & 4:1”。向管中加入預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基，以便在步驟3中加入FuGENE HD試劑和步驟2中加入DNA后的最終體積為100微升。

向每個(gè)管中加入2微克DNA。渦旋混合一秒或輕彈管子以混合。

3.) 向稀釋后的DNA中加入FuGENE HD試劑（無(wú)抗生素或殺真菌劑）：

直接將FuGENE HD試劑滴入每個(gè)六個(gè)管中的培養(yǎng)基里，避免與塑料管壁接觸：第一個(gè)管中加入3微升，第二個(gè)管中加入4微升，第三個(gè)管中加入5微升，第四個(gè)管中加入6微升，第五個(gè)管中加入7微升，最后一個(gè)管中加入8微升。現(xiàn)在每個(gè)管中的體積應(yīng)等于100微升。

4.) 混合并孵化復(fù)合物：

輕敲管子或渦旋混合一秒以混合內(nèi)容物。在室溫下孵化轉(zhuǎn)染試劑：DNA復(fù)合物5-15分鐘。

5.) 將復(fù)合物加入細(xì)胞：

從孵化器中取出培養(yǎng)容器。無(wú)需移除生長(zhǎng)培養(yǎng)基。以滴加方式將轉(zhuǎn)染試劑：DNA復(fù)合物加入細(xì)胞。（有關(guān)向特定容器大小添加復(fù)合物數(shù)量的詳細(xì)信息，請(qǐng)參見(jiàn)表1）。搖動(dòng)孔板或燒瓶以確保分布到整個(gè)板表面。

6.) 將細(xì)胞放回孵化器，直到進(jìn)行基因表達(dá)檢測(cè)。

一旦FuGENE HD試劑：DNA復(fù)合物已加入細(xì)胞，就無(wú)需移除并更換為新鮮培養(yǎng)基（與某些其他轉(zhuǎn)染試劑不同）。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，大多數(shù)常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞類型（COS-1、CHO-K1、HEK-293、HeLa）在進(jìn)行基因表達(dá)檢測(cè)（24-72小時(shí)后）之前持續(xù)暴露于試劑：DNA復(fù)合物，不會(huì)影響活性。如果您希望在轉(zhuǎn)染過(guò)程中（步驟4）使用無(wú)血清培養(yǎng)基，則在轉(zhuǎn)染后3-8小時(shí)內(nèi)用含血清的培養(yǎng)基替換。如果您觀察到超過(guò)10%的細(xì)胞死亡，請(qǐng)參考故障排除部分。

艾美捷科技是FuGENE的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。