HiSense? UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）熱敏感型含有在海洋細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的酶。與大腸桿菌中的UNG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）一樣，它水解單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶-糖苷鍵，切除尿嘧啶并在DNA中產(chǎn)生堿基敏感的無(wú)堿基位點(diǎn)。這些無(wú)堿基位點(diǎn)可以通過(guò)內(nèi)切核酸酶、熱處理或堿基處理水解。根據(jù)DNA的制備方式，尿嘧啶DNA糖基化酶可以用來(lái)實(shí)現(xiàn)一般性、位點(diǎn)特異性或鏈特異性的含尿嘧啶DNA斷裂。這種酶顯示出較低的熱穩(wěn)定性，因此更容易失活。

尿嘧啶-DNA糖基化酶可以用來(lái)在任何含有胸苷殘基的位點(diǎn)切割DNA。

由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的熱敏感性，其主要用途是預(yù)防PCR中的交叉污染。與大腸桿菌中的酶相比；使用這種UNG制劑，沒有必要在擴(kuò)增后立即冷凍PCR產(chǎn)物，或者將反應(yīng)混合物保持在+70°C。

艾美捷CellSafe HiSense UDG熱不穩(wěn)定蛋白#SCU-100組成：

Components                                    Size

Uracil-DNA Glycosylase(UDG) heat labile              100 ?l (1 unit/?l)

儲(chǔ)存：

在-20℃下儲(chǔ)存檢查產(chǎn)品標(biāo)簽上的有效期。

CellSafe HiSense UDG熱不穩(wěn)定蛋白特點(diǎn)：

低熱穩(wěn)定性和易于失活，包括來(lái)自海洋細(xì)菌的酶。

高效水解單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶-糖苷鍵。

預(yù)防PCR中的交叉污染。

測(cè)試方案：

1) 向20~50微升的PCR混合液中加入1微升（1單位）UDG。

2) 在25℃下反應(yīng)5~10分鐘。

3) 在95℃下加熱2分鐘以使UDG失活。

4) 使用經(jīng)過(guò)UDG處理的PCR混合液進(jìn)行PCR。

CellSafe HiSense UDG熱不穩(wěn)定蛋白結(jié)果：

使用PCR產(chǎn)物（包括尿嘧啶堿基）的尿嘧啶DNA糖基化酶的效率

泳道 1: 含有dUTP的1KB PCR產(chǎn)物的108個(gè)拷貝

泳道 2: 含有dUTP的1KB PCR產(chǎn)物的107個(gè)拷貝

泳道 3: 含有dUTP的1KB PCR產(chǎn)物的106個(gè)拷貝

泳道 4: 含有dUTP的1KB PCR產(chǎn)物的105個(gè)拷貝

泳道 5: 100bp DNA梯度

泳道 6: 含有dUTP的PCR產(chǎn)物的108個(gè)拷貝

泳道 7: 含有dUTP的PCR產(chǎn)物的107個(gè)拷貝

泳道 8: 含有dUTP的PCR產(chǎn)物的106個(gè)拷貝

泳道 9: 含有dUTP的PCR產(chǎn)物的105個(gè)拷貝

使用包括尿嘧啶堿基的連續(xù)稀釋的PCR產(chǎn)物進(jìn)行了尿嘧啶DNA糖基化酶的效率測(cè)試。同時(shí)，HiSense? Taq主混合液也被用作陰性對(duì)照進(jìn)行了測(cè)試。反應(yīng)混合液先在25°C下孵育5分鐘，然后95°C下5分鐘，接著進(jìn)行25個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95°C下30秒，60°C下30秒，72°C下1分鐘。HiSense? Taq主混合液（含UDG）除了dATP、dGTP、dCTP和dTTP外，還含有dUTP。

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