ELISpot和FluoroSpot是評(píng)估疫苗免疫反應(yīng)中最常用的免疫分析方法之一。它們以其靈敏度高、操作簡(jiǎn)便和定量能力強(qiáng)而聞名，已成為疫苗研究中不可或缺的工具，從臨床前測(cè)試到臨床試驗(yàn)都有廣泛應(yīng)用。ELISpot和FluoroSpot分析使研究人員能夠通過(guò)檢測(cè)和計(jì)數(shù)疫苗特異性T細(xì)胞和B細(xì)胞反應(yīng)來(lái)表征免疫記憶、識(shí)別潛在疫苗靶點(diǎn)以及測(cè)量免疫反應(yīng)的持久性。

為什么在疫苗研究中使用ELISpot和FluoroSpot？

ELISpot和FluoroSpot在單細(xì)胞水平上識(shí)別抗原特異性免疫反應(yīng)方面具有極高的靈敏度。這使得這兩種檢測(cè)方法對(duì)于檢測(cè)罕見(jiàn)免疫反應(yīng)至關(guān)重要的疫苗研究非常理想。ELISpot和FluoroSpot能夠?qū)崿F(xiàn)：

- 抗原特異性細(xì)胞的定量分析

- 多分析物檢測(cè)（FluoroSpot），用于分析多功能T細(xì)胞

- 長(zhǎng)期免疫監(jiān)測(cè)

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISpot）和熒光斑點(diǎn)（FluoroSpot）檢測(cè)方法用途廣泛，既可以用于檢測(cè)T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌，也可以用于分析疫苗接種后抗原特異性B細(xì)胞。

基礎(chǔ)研究：識(shí)別感興趣的表位和抗原，并研究佐劑配方。利用干擾素γ酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)IFN-γ ELISpot（貨號(hào)3321-4AST-2，ELISpot Plus: Mouse IFN-γ (ALP)）可以輕松篩選大量的T細(xì)胞表位以及測(cè)試佐劑的有效性。熒光斑點(diǎn)FluoroSpot（貨號(hào)FSP-314245-2，F(xiàn)luoroSpot Plus: Mouse IFN-γ/IL-2/TNF-α）可以進(jìn)一步揭示疫苗是驅(qū)動(dòng)Th1還是Th2反應(yīng)，以及由此產(chǎn)生的體液反應(yīng)。B細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot（貨號(hào)3825-2A，ELISpot Flex: Mouse IgG (ALP)）和免疫球蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA（貨號(hào)3825-1AD-6，ELISA Flex: Mouse IgG (ALP)）可用于識(shí)別抗原特異性B細(xì)胞和體液反應(yīng)。

臨床前研究：在動(dòng)物模型（小鼠、大鼠、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物等）中評(píng)估疫苗效力，以測(cè)試效力、耐受性、優(yōu)化劑量、毒性以及期望或不期望的免疫原性。利用熒光斑點(diǎn)FluoroSpot可以從樣本中獲取更多數(shù)據(jù)，通過(guò)評(píng)估反應(yīng)T細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子以及評(píng)估早期急性B細(xì)胞反應(yīng)或類(lèi)別轉(zhuǎn)換以及隨后類(lèi)別轉(zhuǎn)換的IgG+記憶B細(xì)胞的發(fā)育。

臨床試驗(yàn)：監(jiān)測(cè)人類(lèi)受試群體的免疫反應(yīng)，以評(píng)估期望的免疫原性和效力。同樣，為什么不使用FluoroSpot通過(guò)評(píng)估輔助T細(xì)胞極化和高親和力記憶B細(xì)胞的產(chǎn)生來(lái)從樣本中獲得更多的數(shù)據(jù)？通常會(huì)進(jìn)行縱向采樣，以評(píng)估免疫反應(yīng)的發(fā)展和持久性。

上市后監(jiān)測(cè)：持續(xù)進(jìn)行免疫監(jiān)測(cè)，以評(píng)估持久的免疫反應(yīng)、是否需要加強(qiáng)針以及T細(xì)胞和B細(xì)胞的免疫記憶，可采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot或熒光斑點(diǎn)FluoroSpot。

監(jiān)測(cè)疫苗特異性T細(xì)胞

在疫苗研究中，細(xì)胞免疫以及高親和力、中和性抗體的生成通常是評(píng)估的主要結(jié)果。T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot檢測(cè)方法可以檢測(cè)到由疫苗衍生肽刺激產(chǎn)生的細(xì)胞因子，如干擾素γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子α（TNF-α），從而提供有關(guān)T細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)度及其功能的見(jiàn)解。使用熒光斑點(diǎn)（FluoroSpot）來(lái)表征多功能T細(xì)胞，可以進(jìn)一步深入了解疫苗反應(yīng)以及哪些T細(xì)胞表型被激活。Mabtech甚至設(shè)計(jì)了一種非常適合評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)的熒光斑點(diǎn)試劑盒：熒光斑點(diǎn)Path：人免疫監(jiān)測(cè)（3色）,貨號(hào)FSP-010209-TD-2。

示例：COVID-19疫苗研究

在COVID-19大流行期間，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot被廣泛用于評(píng)估對(duì)SARS-CoV-2的T細(xì)胞反應(yīng)。有研究人員使用了熒光斑點(diǎn)Flex：人干擾素γ/腫瘤壞死因子α/白細(xì)胞介素2/顆粒酶B檢測(cè)試劑盒，分析了對(duì)SARS-CoV-2變異株的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)三劑mRNA疫苗提供了增強(qiáng)的T細(xì)胞反應(yīng)性，即使是對(duì)奧密克戎等變異株也是如此。

熒光斑點(diǎn)Path：SARS-CoV-2（S1scan+SNMO）人干擾素γ/白細(xì)胞介素2，貨號(hào)FSP-0102-P1-1，已在多篇文獻(xiàn)中被用于計(jì)算疫苗接種或感染后針對(duì)SARS-CoV-2特異性的T細(xì)胞。該試劑盒不僅包含所有所需的熒光斑點(diǎn)試劑，還包括經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的、特別設(shè)計(jì)的肽段池，這些肽段池已在真實(shí)的疫苗接種和感染患者樣本上進(jìn)行了驗(yàn)證。

監(jiān)測(cè)疫苗特異性B細(xì)胞

通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot分析B細(xì)胞反應(yīng)，可以檢測(cè)和計(jì)數(shù)針對(duì)疫苗抗原的抗體分泌細(xì)胞。這對(duì)于病毒疫苗尤為重要，因?yàn)轶w液免疫在其中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。這些檢測(cè)方法可以定量檢測(cè)記憶B細(xì)胞和漿母細(xì)胞，從而全面了解早期和后期的體液免疫反應(yīng)。

示例：流感疫苗和COVID-19疫苗

流感疫苗的研究表明，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot是檢測(cè)長(zhǎng)期存活的記憶B細(xì)胞反應(yīng)的敏感方法，可能比單獨(dú)檢測(cè)抗體滴度更為可靠。同樣，在COVID-19疫苗的研究中，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISpot）檢測(cè)方法被用于分析長(zhǎng)期記憶B細(xì)胞反應(yīng)，這對(duì)于理解防止再次感染的免疫反應(yīng)至關(guān)重要。

疫苗研究領(lǐng)域：

流感疫苗：流感疫苗對(duì)于控制季節(jié)性流感爆發(fā)以及預(yù)防易感人群的嚴(yán)重疾病至關(guān)重要。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot檢測(cè)方法經(jīng)常被用于流感疫苗的開(kāi)發(fā)，以評(píng)估T細(xì)胞和B細(xì)胞的反應(yīng)。通過(guò)檢測(cè)干擾素γ（IFN-γ）和白細(xì)胞介素2（IL-2）等細(xì)胞因子，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot能夠提供有關(guān)疫苗接種或感染后T細(xì)胞激活的詳細(xì)信息。熒光斑點(diǎn)FluoroSpot可以同時(shí)評(píng)估多種細(xì)胞因子反應(yīng)，捕捉到T細(xì)胞對(duì)流感抗原（如血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA））反應(yīng)的全部功能范圍。2014年的一項(xiàng)研究甚至表明，與流式細(xì)胞術(shù)方法相比，熒光斑點(diǎn)FluoroSpot在評(píng)估流感特異性反應(yīng)方面具有更高的靈敏度。對(duì)于B細(xì)胞反應(yīng)，熒光斑點(diǎn)FluoroSpot可以檢測(cè)流感特異性的抗體分泌細(xì)胞（ASCs），從而深入了解體液免疫以及保護(hù)性抗體的生成。這些工具在研究季節(jié)性疫苗與實(shí)驗(yàn)性通用流感疫苗的免疫反應(yīng)方面特別有用，通用流感疫苗旨在誘導(dǎo)更廣泛和更持久的免疫反應(yīng)。這些檢測(cè)方法幫助研究人員優(yōu)化疫苗配方和佐劑，跟蹤免疫反應(yīng)隨時(shí)間的變化，并識(shí)別保護(hù)相關(guān)的因素，從而支持更有效流感疫苗的開(kāi)發(fā)。

瘧疾疫苗：瘧疾疫苗的開(kāi)發(fā)一直充滿挑戰(zhàn)，尤其是在瘧疾發(fā)病率較低的地區(qū)，自然獲得的免疫力非常有限。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot檢測(cè)方法已成為評(píng)估瘧疾特異性T細(xì)胞和B細(xì)胞反應(yīng)的必要工具。這些檢測(cè)方法被用于檢測(cè)對(duì)關(guān)鍵瘧疾抗原的反應(yīng)，例如環(huán)子孢子蛋白（CSP）和瘧原蟲(chóng)表面蛋白1（MSP1），這些抗原通常用于包含輻照子孢子或重組蛋白的實(shí)驗(yàn)性疫苗中。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot的高靈敏度使其能夠檢測(cè)到頻率較低的抗原特異性反應(yīng)，這使其成為評(píng)估臨床試驗(yàn)中疫苗效力以及在瘧疾自然暴露率較低的人群中評(píng)估疫苗效力的寶貴工具。

SARS-CoV-2 疫苗：正如以上提到的，在 COVID-19 大流行期間，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot在快速開(kāi)發(fā)針對(duì) SARS-CoV-2 的疫苗中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。即使在今天，這些檢測(cè)方法仍在用于評(píng)估這些疫苗誘導(dǎo)的免疫記憶的持久性以及它們對(duì)新出現(xiàn)的變體的有效性。

結(jié)核病疫苗：結(jié)核病仍然是一個(gè)重大的全球健康挑戰(zhàn)，需要一種能夠產(chǎn)生持久免疫力的有效疫苗。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISpot和熒光斑點(diǎn)FluoroSpot檢測(cè)方法在結(jié)核病疫苗研究中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，為T(mén)細(xì)胞反應(yīng)提供了詳細(xì)的見(jiàn)解。特別是熒光斑點(diǎn)FluoroSpot檢測(cè)方法可以同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞因子，如干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細(xì)胞介素2（IL-2），這些細(xì)胞因子與對(duì)抗結(jié)核分枝桿菌的保護(hù)性免疫有關(guān)。通過(guò)分析多功能T細(xì)胞反應(yīng)，研究人員可以更好地了解與病原體負(fù)荷減少相關(guān)的免疫機(jī)制，最終有助于開(kāi)發(fā)更有效的結(jié)核病疫苗，這些疫苗能夠激發(fā)強(qiáng)大且持久的免疫反應(yīng)。