IgE是血清中含量最少的免疫球蛋白，通常含量約為100 ng/mL。它參與過(guò)敏反應(yīng)，與嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞上的Fc受體結(jié)合。抗原與IgE的后續(xù)結(jié)合會(huì)觸發(fā)組胺和其他血管活性胺的釋放。在哮喘、濕疹、鼻炎和寄生蟲(chóng)感染中，IgE水平會(huì)升高。

IgE（猴）ELISA試劑盒用于測(cè)量獼猴和食蟹猴血清中的IgE。該測(cè)定使用兩種IgE單克隆抗體，一種用于固相固定（微孔板孔）。另一種與HRP結(jié)合，用于檢測(cè)。

艾美捷IgE(猴)ELISA試劑盒：

貨號(hào)：KA2450

校準(zhǔn)范圍：5至160 ng/mL

適用樣本：血清

樣本體積：100 ?L（稀釋樣本）

標(biāo)記：HRP結(jié)合物

檢測(cè)方法：比色法

監(jiān)管狀態(tài)：僅供研究使用（RUO）

反應(yīng)性：猴

應(yīng)用：定量

儲(chǔ)存說(shuō)明：將凍干標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20℃。將所有其他組分儲(chǔ)存于4℃。

僅供研究使用（RUO）

測(cè)定原理：

稀釋的血清樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在微孔板孔中與HRP結(jié)合物一起孵育一小時(shí)。如果存在IgE分子，它們會(huì)被固定和檢測(cè)抗體夾在中間。然后洗滌孔。加入TMB試劑并孵育20分鐘。如果存在IgE，這將導(dǎo)致藍(lán)色顏色的產(chǎn)生。通過(guò)加入終止液停止顏色發(fā)展，顏色變?yōu)辄S色。在450 nm處測(cè)量吸光度。樣本中IgE的濃度與吸光度成正比，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出。

試劑準(zhǔn)備：

? 稀釋液準(zhǔn)備

提供的稀釋液為10倍濃縮液。使用前，估計(jì)您的測(cè)定所需的最終稀釋液體積，并將一份（1）體積的10倍濃縮液與九份（9）體積的蒸餾水或去離子水稀釋。

? 洗滌液準(zhǔn)備

提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前，將瓶中內(nèi)容物（50 mL）與950 mL蒸餾水或去離子水稀釋。

? 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備

用1.0 mL蒸餾水或去離子水復(fù)溶IgE儲(chǔ)備液（復(fù)溶后的儲(chǔ)備液在4℃下穩(wěn)定一天，但如需日后使用，應(yīng)分裝并冷凍于-20℃）。

標(biāo)記6個(gè)聚丙烯或玻璃管，分別為160、80、40、20、10和5 ng/mL。

在標(biāo)記為160 ng/mL的管中，加入IgE儲(chǔ)備瓶標(biāo)簽上詳細(xì)說(shuō)明的稀釋液體積。然后加入指示體積的IgE儲(chǔ)備液并輕輕混合。這提供了160 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。

向標(biāo)記為80、40、20、10和5 ng/mL的管中各加入250 μL稀釋液。

通過(guò)將160 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品250 μL與標(biāo)記為80 ng/mL的管中的250 μL稀釋液混合稀釋，制備80 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品。

同樣通過(guò)兩倍連續(xù)稀釋法制備剩余的標(biāo)準(zhǔn)品。

樣本準(zhǔn)備：

我們發(fā)現(xiàn)獼猴和食蟹猴血清中IgE濃度范圍從小于25 ng/mL到1000 ng/mL。最佳稀釋度應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定，但我們建議初步以10倍稀釋度測(cè)試樣本。為避免基質(zhì)效應(yīng)，不要使用小于10倍（即5倍）的樣本稀釋度。

測(cè)定步驟：

在支架中固定所需數(shù)量的涂覆孔。

向孔中加入100 ?L HRP結(jié)合物。

向孔中加入100 ?L標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋樣本（我們建議樣本進(jìn)行雙份測(cè)試）。

在軌道式微孔板振蕩器上以150 rpm和25℃孵育一小時(shí)。

吸出微孔板孔中的內(nèi)容物，并使用平板洗滌器（400 ?L/孔）用1倍洗滌液洗滌孔5次。整個(gè)洗滌過(guò)程應(yīng)盡快完成。

如有必要，將孔用力敲擊在吸水紙或紙巾上以去除殘留洗滌緩沖液。

向每個(gè)孔中加入100 ?L TMB試劑。

在室溫（25℃）下，于軌道式微孔板振蕩器上以100-150 rpm輕輕混合20分鐘。

向每個(gè)孔中加入100 ?L終止液以停止反應(yīng)。

輕輕混合。確保所有藍(lán)色完全變?yōu)辄S色非常重要。

在5分鐘內(nèi)用微孔板讀數(shù)器在450 nm處測(cè)量吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說(shuō)明，不應(yīng)用于計(jì)算未知量。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，應(yīng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。