谷氨酸是一種非必需氨基酸，在體內(nèi)發(fā)揮多種重要的代謝作用。作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，它促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞之間的通信，有助于大腦功能和認(rèn)知。谷氨酸也是蛋白質(zhì)合成中的關(guān)鍵分子，有助于其他氨基酸的生成。此外，谷氨酸還是谷胱甘肽的前體，谷胱甘肽是一種強(qiáng)效抗氧化劑，能夠幫助細(xì)胞抵御氧化損傷。谷氨酸還參與能量代謝，因?yàn)樗梢赞D(zhuǎn)化為α-酮戊二酸，這是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)關(guān)鍵中間體。AkrivisBio的谷氨酸檢測(cè)試劑盒是一種簡(jiǎn)單、靈敏的檢測(cè)手段，能夠檢測(cè)多種組織中的谷氨酸含量，檢測(cè)靈敏度可達(dá)每孔小于0.2納摩爾。

艾美捷谷氨酸測(cè)定試劑盒：

貨號(hào)：MA-0133

規(guī)格：100孔

樣本類(lèi)型：細(xì)胞裂解液、組織提取液、尿液、血清、血漿、其他生物流體

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測(cè)方法：比色法，檢測(cè)波長(zhǎng)450納米

檢測(cè)類(lèi)型：定量

應(yīng)用：基于微孔板的比色法檢測(cè)，用于測(cè)量樣本中谷氨酸的濃度，最低檢測(cè)濃度可達(dá)每孔0.2納摩爾。

靈敏度：<0.2納摩爾/孔

儲(chǔ)存條件：-20°C

運(yùn)輸條件：凝膠冷藏包

谷氨酸測(cè)定試劑盒組成：

-檢測(cè)緩沖液：25毫升，貨號(hào)WM MA-0133-A

-谷氨酸脫氫酶：凍干粉，綠色，貨號(hào)MA-0133-B

-NAD/四氮雜卓混合液：凍干粉，紅色，貨號(hào)MA-0133-C

-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品：100微升，黃色，貨號(hào)MA-0133-D

谷氨酸測(cè)定試劑盒檢測(cè)原理：

1. 谷氨酸在谷氨酸脫氫酶的作用下被氧化轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸和氨（NH?），同時(shí)NAD被轉(zhuǎn)化為NADH。

2. NADH用于將四氮雜卓轉(zhuǎn)化為具有最大吸收波長(zhǎng)為450納米的高色素甲臜。

儲(chǔ)存和處理：

將試劑盒儲(chǔ)存于-20°C。使用前將檢測(cè)緩沖液恢復(fù)至室溫。打開(kāi)試劑瓶前請(qǐng)短暫離心。

檢測(cè)緩沖液：直接使用，儲(chǔ)存于4°C。

谷氨酸脫氫酶：用220微升檢測(cè)緩沖液復(fù)溶。儲(chǔ)存于-20°C。使用時(shí)保持在冰上。如果需要在一段時(shí)間內(nèi)反復(fù)使用該試劑，建議將酶分裝成小份量并儲(chǔ)存于-20°C。

NAD/四氮雜卓混合液：用220微升去離子水復(fù)溶。

谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（40 mM）：直接使用。

檢測(cè)步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：將10微升谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至990微升檢測(cè)緩沖液中，配制成0.4 mM的溶液。將0、5、10、15、20、25微升的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別轉(zhuǎn)移至96孔板的多個(gè)孔中（每個(gè)濃度重復(fù)兩次），以生成0、2、4、6、8、10納摩爾/孔的標(biāo)準(zhǔn)系列。用檢測(cè)緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升。

2. 樣本準(zhǔn)備：將組織（10毫克）或細(xì)胞（1×10?）在100微升檢測(cè)緩沖液中勻漿。以16,000×g離心5分鐘，去除顆粒。將上清液轉(zhuǎn)移至新的試管中。將2-50微升樣本轉(zhuǎn)移至96孔板中。用檢測(cè)緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升。準(zhǔn)備一個(gè)平行的樣本孔作為背景對(duì)照。建議測(cè)試幾個(gè)不同濃度的樣本，以確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

注意：某些樣本可能會(huì)產(chǎn)生較高的背景值。為了應(yīng)對(duì)這種情況，建議將樣本以雙份運(yùn)行，其中一份用作背景對(duì)照。

3. 啟動(dòng)反應(yīng)：每個(gè)反應(yīng)需要100微升反應(yīng)混合液。

4. 測(cè)量：在37°C下，使用微孔板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)450納米處的吸光度，持續(xù)30分鐘。

5. 典型結(jié)果：

6. 計(jì)算：

-從所有標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)中減去0標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)。繪制背景校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。該斜率定義了從檢測(cè)中獲得的OD/納摩爾值。

-從每個(gè)未知樣本對(duì)中減去背景對(duì)照孔的讀數(shù)。將背景校正后的未知樣本值除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以確定樣本孔中的谷氨酸含量。

-將這些值轉(zhuǎn)換為原始樣本中的谷氨酸含量：

-A. 孔中谷氨酸的納摩爾數(shù) / 應(yīng)用于孔中的樣本微升數(shù) = 應(yīng)用于孔中的樣本中的谷氨酸納摩爾數(shù)/微升

-B. 應(yīng)用于孔中的樣本中的谷氨酸納摩爾數(shù)/微升 × 應(yīng)用于孔中的樣本總體積 = 應(yīng)用于孔中的樣本中的總谷氨酸納摩爾數(shù)

-C. 應(yīng)用于孔中的樣本中的總谷氨酸納摩爾數(shù) / 毫克組織（或細(xì)胞數(shù)量等） = 納摩爾數(shù)/毫克（細(xì)胞數(shù)量等）