解析文章：《Corticotropin-releasing factor-dopamine interactions in male and female macaque: Beyond the classic VTA》 

鏈接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/syn.22284

這篇文章探討了促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF）與多巴胺（DA）系統(tǒng)在獼猴中的相互作用，特別是關注于CRF在獼猴腹側被蓋區(qū)（VTA）外側部——外側被蓋背側核（PBP）和內(nèi)側被蓋腹側核（A8）區(qū)域的作用。

一、背景

多巴胺系統(tǒng)的重要性：

多巴胺是一種重要的神經(jīng)遞質，參與多種基本行為，包括正負強化、決策制定、工作記憶、刺激顯著性和目的性運動等。大多數(shù)多巴胺神經(jīng)元位于腹側中腦的三個解剖區(qū)域：腹側被蓋區(qū)（VTA，A10）、黑質致密部（SNc，A9）和內(nèi)側被蓋腹側核（A8）。

CRF的作用：

CRF是一種典型的“應激”肽，在應激反應中起關鍵作用，并靶向腹側中腦多巴胺系統(tǒng)。CRF對多巴胺神經(jīng)元的放電具有調(diào)制作用，但具體機制尚不完全清楚。

研究區(qū)域的選擇：

PBP和A8區(qū)域在靈長類動物中比例較大，與VTA相比，這些區(qū)域的多巴胺神經(jīng)元對潛在顯著刺激（無論價值如何）作出反應，即“顯著性”編碼。

二、方法

實驗動物：

實驗使用了6只年輕獼猴（3只雄性和3只雌性），所有實驗均遵循美國國立衛(wèi)生研究院的指導原則，旨在最小化動物使用和痛苦。

組織處理和免疫組化：

動物在深度麻醉下通過心臟灌注處死，首先用生理鹽水，然后用4%多聚甲醛固定。大腦被取出并在4%多聚甲醛中過夜固定，然后沉浸在遞增濃度的蔗糖溶液中。使用針對CRF（T-4037，Peninsula Laboratories）、酪氨酸羥化酶（TH，Millipore）和鈣結合蛋白D-28k（CaBP，Sigma）的抗體進行免疫組化和雙重免疫過氧化物酶染色。

電子顯微鏡成像和數(shù)據(jù)分析：

使用透射電子顯微鏡捕獲圖像，并使用Adobe Photoshop和Illustrator進行亮度和對比度調(diào)整。分析CRF標記的軸突終末與TH陽性（DA）和TH陰性（非DA）樹突的突觸接觸。

三、實驗

CRF免疫反應性：

CRF標記主要在軸突終末中可見，主要與TH陰性樹突形成接觸。在PBP和A8區(qū)域，CRF陽性終末與TH陰性樹突形成的對稱（假設性抑制性）突觸顯著多于不對稱（假設性興奮性）突觸。

CRF終末與樹突的接觸：

在PBP和A8區(qū)域，CRF陽性終末與TH陰性樹突的接觸顯著多于與TH陽性樹突的接觸。在兩個區(qū)域中，CRF陽性終末與TH陰性樹突形成的對稱突觸比例均較高。

性別差異：

在PBP區(qū)域，雄性獼猴中CRF陽性突觸與TH陰性樹突的接觸顯著多于雌性。

在A8區(qū)域，雄性獼猴中CRF陽性突觸與TH陽性樹突的接觸顯著多于雌性，而與TH陰性樹突的接觸在性別間無顯著差異。

四、結論

CRF在PBP和A8區(qū)域的作用：

CRF主要在假設性抑制性終末中表達，這些終末主要與TH陰性樹突（推測為GABA能中間神經(jīng)元）形成接觸。在基線條件下，CRF在PBP和A8區(qū)域可能主要通過抑制GABA能中間神經(jīng)元來解除對多巴胺神經(jīng)元的抑制，從而間接影響多巴胺的釋放。

性別差異：

在PBP區(qū)域，雄性獼猴中CRF對GABA能中間神經(jīng)元的抑制可能更強。在A8區(qū)域，雄性獼猴中CRF對多巴胺神經(jīng)元的直接抑制可能更強。

CRF在應激反應中的作用：

CRF在應激反應中可能通過調(diào)制多巴胺系統(tǒng)來影響行為反應，特別是在處理顯著刺激時。未來的研究應進一步探討CRF在不同應激條件下的動態(tài)變化及其對多巴胺系統(tǒng)功能的影響。

五、T-4037產(chǎn)品的作用和價值

T-4037是Peninsula Laboratories生產(chǎn)的一種針對CRF的多克隆抗體，用于免疫組化和電子顯微鏡研究。在本文中，T-4037抗體發(fā)揮了關鍵作用，使研究人員能夠準確定位CRF在獼猴腹側中腦多巴胺系統(tǒng)中的分布，并分析CRF與多巴胺神經(jīng)元及非多巴胺神經(jīng)元之間的相互作用。

高特異性：

T-4037抗體對CRF具有高度特異性，能夠在軸突終末中準確標記CRF的存在。

這種特異性確保了研究結果的可靠性和準確性。

敏感性：

T-4037抗體在電子顯微鏡水平下表現(xiàn)出良好的敏感性，能夠清晰地顯示CRF免疫反應性顆粒在軸突終末中的分布。這使得研究人員能夠精確量化CRF與不同類型樹突之間的突觸接觸。

廣泛應用：

T-4037抗體不僅適用于獼猴等靈長類動物的研究，還可用于其他哺乳動物模型中的CRF研究。它為探討CRF在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能和作用機制提供了有力的工具。

推動神經(jīng)科學研究：

通過使用T-4037抗體進行的本研究揭示了CRF在獼猴腹側中腦多巴胺系統(tǒng)中的新作用機制。這為理解應激、情緒和認知等神經(jīng)生物學過程提供了新的視角和思路。

總之，本文通過使用T-4037抗體等研究工具，深入探討了CRF在獼猴腹側中腦多巴胺系統(tǒng)中的作用機制及其與性別差異的關聯(lián)。這些發(fā)現(xiàn)不僅增進了我們對CRF和多巴胺系統(tǒng)相互作用的理解，也為未來的神經(jīng)科學研究提供了新的方向和啟示。

BMA Biomedicals品牌Monoclonal Antibody To Mouse MHC Class II

促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF），純抗血清多克隆抗體（貨號：T-4037）

兔抗促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF）（人，小鼠，大鼠）[UniProt: P06850, Q8CIT0, P01143]

促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF）是一種由196個氨基酸的前激素衍生而來的41個氨基酸的肽激素。它是下丘腦對應激的反應，刺激促腎上腺皮質激素（ACTH）的合成和分泌。CRF也在外周組織和胎盤中合成，已知可抑制食欲并增加主觀焦慮感。該抗體是通過將CRF偶聯(lián)載體蛋白免疫兔而產(chǎn)生的。

Product number: T-4037

Clone: polyclonal

Host species: Rabbit IgG

Quantity: 50 ul

Format: Neat undiluted antiserum, lyophilized, packaged under nitrogen.

Reconstitute by adding 50?l distilled water. This will give the equivalent

of undiluted antiserum

Stability: Original vial: at least one year at 4? - 8?C from date of delivery. Minimize

repeated thawing and freezing of the antiserum by freezing aliquots at

-20?C or below.

Reacts: Human, Mouse, Rat

Applications:This antibody has been tested and validated in ELISA against CRF and

in immunohistochemistry (IHC). Other applications like FACS or Western

Blot may work as well. Optimal dilutions should be determined by the

end user.

Immunogen: Synthetic peptide H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-PheHis-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Glu-Gln-Leu-Ala-GlnGln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Met-Glu-Ile-Ile-NH2 coupled to carrier

protein