EpiNext? RRBS文庫快速試劑盒專為Illumina平臺(tái)設(shè)計(jì)，用于制備簡化代表性亞硫酸氫鹽測序（RRBS）DNA文庫。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化的協(xié)議和組分，允許使用亞納克級(jí)DNA進(jìn)行MSP1 DNA消化和亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，隨后在不到4小時(shí)內(nèi)完成非條形碼（單重）或條形碼（多重）文庫構(gòu)建。

艾美捷Epigentek-EpiNext RRBS文庫快速試劑盒（#P-1069-24）具有以下優(yōu)勢：

創(chuàng)新方法：允許快速制備合適大小的富含CpG的DNA片段，并進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。亞硫酸氫鹽處理后的DNA可以直接連接到接頭上，從而消除了在其他RRBS方法中常見的接頭連接片段斷裂的可能性。

快速且簡化的流程：從DNA酶消化到可直接使用的文庫DNA，整個(gè)過程可在4小時(shí)內(nèi)完成。

完全轉(zhuǎn)化：將未甲基化的胞嘧啶完全轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（>99%），甲基化胞嘧啶錯(cuò)誤轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶的情況極少。

高靈敏度和效率：創(chuàng)新的亞硫酸氫鹽DNA接頭連接方法消除了片段丟失和選擇偏差，使輸入DNA量可低至10 ng，非常適合珍貴且有限樣本的甲基化分析。該試劑盒可用于非條形碼（單重）和條形碼（多重）DNA文庫的制備。

極其便捷：試劑盒包含DNA文庫制備每個(gè)步驟所需的所有組分，足夠用于MSP1消化、亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化、連接、清潔、大小選擇和文庫擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)亞硫酸氫鹽DNA文庫制備的簡化，以獲得最可靠和一致的結(jié)果。

最小偏差：超高保真擴(kuò)增可實(shí)現(xiàn)DNA文庫的高產(chǎn)量，并具有最小的序列偏差和低錯(cuò)誤率。

廣泛的樣本適用性：起始材料可以是來自各種組織/細(xì)胞樣本的基因組DNA，如新鮮和冷凍組織、培養(yǎng)細(xì)胞（來自燒瓶或微孔板）、顯微切割樣本、福爾馬林固定石蠟包埋組織、活檢樣本、胚胎細(xì)胞、血漿/血清樣本和體液樣本等。

EpiNext RRBS文庫快速試劑盒原理與流程：

該試劑盒包含從微量輸入DNA生成的亞硫酸氫鹽DNA直接制備文庫所需的所有試劑。在此制備過程中，通過MSP1消化富集合適大小的富含CpG的DNA片段，并進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。亞硫酸氫鹽處理后的DNA以單鏈形式存在，隨后同時(shí)轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA并連接接頭。接下來，使用MQ結(jié)合珠子對(duì)連接的片段進(jìn)行大小選擇和純化，最后使用高保真PCR混合液進(jìn)行擴(kuò)增。該流程確保從最少的起始材料中獲得最大產(chǎn)量，并提供具有低錯(cuò)誤率和最小偏差的文庫DNA的高精度擴(kuò)增。

圖：庫片段的大小分布。使用EpiNext從人Hela DNA制備RRBS DNA文庫RRBS文庫快速試劑盒：輸入DNA：20 ng（紅色痕量），200 ng（藍(lán)色痕量）。片段大小為160-800bps，峰值大小為320 bps。

起始材料：

起始材料可以是來自各種組織/細(xì)胞樣本的基因組DNA，如新鮮和冷凍組織、培養(yǎng)細(xì)胞（來自燒瓶或微孔板）、顯微切割樣本、福爾馬林固定石蠟包埋組織、血漿/血清、體液樣本等。DNA不應(yīng)經(jīng)過任何先前的限制性酶消化步驟。質(zhì)粒DNA可用于亞硫酸氫鹽處理，無論是否經(jīng)過預(yù)先線性化，因?yàn)樵撛噭┖性试S在整個(gè)DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化過程中保持DNA的變性狀態(tài)，并直接將接頭連接到亞硫酸氫鹽DNA上。DNA輸入量可在10 ng至400 ng之間。為了獲得最佳制備效果，建議輸入量為200 ng。