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表觀遺傳激活或失活在許多重要人類疾病中起著關(guān)鍵作用,尤其是在癌癥中。
表觀遺傳基因失活的主要機制是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶引起的基因組DNA中CpG島的甲基化。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)通過染色質(zhì)依賴的轉(zhuǎn)錄抑制或激活來控制或調(diào)節(jié)DNA甲基化。HATs將乙酰基團從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移到組蛋白的賴氨酸殘基上。P300是主要的HAT,它催化哺乳動物細胞中組蛋白H3在賴氨酸18(H3K18)上的乙酰化。HDACs和SIRT1/7是主要的組蛋白去乙酰化酶,它們能夠使H3K18去乙酰化。H3K18ac一直被視為轉(zhuǎn)錄活性基因的標志性標記,它僅存在于啟動子下游的5'區(qū)域。H3K18ac的水平也可以通過抑制或激活HATs或HDAC/SIRTs而改變。在血漿或血清中檢測到的循環(huán)H3K18ac已被證明是許多不同疾病或病理變化(如癌癥進展)的標志物。因此,檢測循環(huán)H3K18ac能夠為更好地理解基因激活和沉默的表觀遺傳調(diào)控、與組蛋白修飾相關(guān)的病理過程、疾病相關(guān)生物標志物的篩選以及開發(fā)針對組蛋白修飾的藥物提供有用信息。
EpiQuik?循環(huán)乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)是專為定量檢測血漿和血清中的循環(huán)組蛋白H3K18ac而設(shè)計的。
艾美捷EpiQuik循環(huán)乙酰組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)(#P-3134-48)優(yōu)勢與特點:
1、快速高效的實驗流程,可在2.5小時內(nèi)完成。
2、高靈敏度和特異性。檢測限低至0.5 ng/孔,在血漿/血清中指示量范圍內(nèi)的動態(tài)范圍為1-20 ng/孔。僅識別H3K18ac,與未修飾的H3或其他同一賴氨酸位點的修飾物無交叉反應(yīng)。
3、方便地包含對照用于H3K18ac的定量。
4、條帶微孔板格式使實驗靈活:可手動或高通量操作。
5、簡單、可靠且一致的實驗條件。
基本信息:
質(zhì)量控制:每一批次的EpiQuik?循環(huán)乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)均經(jīng)過預(yù)設(shè)規(guī)格的測試,以確保產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。EpigenTek保證所有產(chǎn)品按照產(chǎn)品說明書中描述的方式發(fā)揮性能。
安全:在使用本產(chǎn)品時,需要穿戴合適的實驗服、一次性手套,并佩戴適當(dāng)?shù)难鄄勘Wo裝置。
產(chǎn)品更新:EpigenTek保留變更或修改任何產(chǎn)品的權(quán)利,以提升其性能和設(shè)計。本用戶指南中的信息可能會隨時更改,恕不另行通知。因此,在使用試劑盒時,請僅使用隨試劑盒提供的用戶指南。
使用限制:EpiQuik?循環(huán)乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)僅供研究使用,不適用于診斷或治療應(yīng)用。
原理與操作流程:
EpiQuik?循環(huán)乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)是用于測量血漿或血清中總H3K18ac的。在使用該試劑盒的實驗中,血漿/血清樣本中乙酰化于K18的組蛋白H3蛋白被涂有抗H3K18ac抗體的條帶孔捕獲。捕獲的H3K18ac蛋白隨后可被檢測抗體識別,并通過比色顯色試劑進行顯色。H3K18ac的比例與吸光強度成正比。通過與標準對照比較,可以定量H3K18ac的絕對量。

圖:從HL-60細胞中使用EpiQuik?總組蛋白提取試劑盒(產(chǎn)品編號:OP0006)制備組蛋白提取物,并將其以不同濃度加入牛血漿中。隨后利用EpiQuik?循環(huán)乙酰化組蛋白H3K18 ELISA試劑盒(比色法)測定了H3K18ac的含量。
運輸與儲存:
該試劑盒分兩部分運輸:第一部分在常溫下運輸,第二部分在4℃的冷凍冰袋中運輸。收到試劑盒后:(1)將DAb和標準對照置于–20℃,避免光照;(2)將WB、HAB、DS、8孔檢測條和對照檢測條置于4℃,避免光照;(3)將剩余組分(SS和粘性覆蓋膜)置于室溫,避免光照。
當(dāng)儲存條件合適時,試劑盒的所有組分自發(fā)貨之日起穩(wěn)定期為6個月。
注意事項:(1)使用前檢查WB(10倍洗液)中是否含有鹽沉淀。如果有,請在室溫或37℃下加熱并搖晃緩沖液,直至鹽重新溶解;(2)檢查DS(顯色液)中是否呈現(xiàn)藍色,這表明溶液受到污染,不應(yīng)使用。為了避免污染,在將DS加入檢測孔之前,先將所需的DS量轉(zhuǎn)移到一個次級容器(試管或小瓶)中。
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