APOBEC3胞嘧啶脫氨酶（載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽3）是一個(gè)DNA/RNA編輯家族，包含7個(gè)亞型：APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G和APOBEC3H。APOBEC3僅存在于哺乳動(dòng)物中，能夠催化單鏈DNA或RNA中胞嘧啶（C）堿基的氨基去除，形成尿嘧啶（U）。APOBEC3引起的遺傳改變會(huì)改變轉(zhuǎn)錄和mRNA處理過(guò)程，并積極參與多種生物學(xué)過(guò)程。APOBEC3是先天免疫系統(tǒng)的一部分，能夠抵御各種DNA或RNA病毒，保護(hù)細(xì)胞的完整性。通過(guò)促進(jìn)單鏈DNA/RNA中胞嘧啶脫氨基為尿嘧啶，APOBEC3在病毒基因組中產(chǎn)生突變，從而抑制病毒復(fù)制。例如，有報(bào)道稱APOBEC3在SARS-CoV-2基因組中引起的C到U突變是主導(dǎo)突變（>50%）。盡管APOBEC3賦予宿主對(duì)包括SARS-CoV-2在內(nèi)的多種病毒的內(nèi)在抗感染能力，但它也可能對(duì)病毒的進(jìn)化產(chǎn)生潛在影響。APOBEC3在癌癥中的DNA突變中貢獻(xiàn)顯著。作為癌癥進(jìn)化的主要驅(qū)動(dòng)力之一，APOBEC3蛋白是多種腫瘤中檢測(cè)到的基因組突變的主要原因之一。超過(guò)50%的癌癥中可以觀察到APOBEC3突變特征，這些特征促進(jìn)了腫瘤的多樣性，進(jìn)一步推動(dòng)疾病進(jìn)展和對(duì)治療的耐藥性。

Epigenase APOBEC3胞嘧啶脫氨酶活性/抑制檢測(cè)試劑盒是一套完整的優(yōu)化緩沖液和試劑，用于測(cè)量來(lái)自人類和其他哺乳動(dòng)物的細(xì)胞提取物或純化的APOBEC3亞型（A3A、A3B、A3C、A3D、A3F和A3H）的總APOBEC3酶活性或抑制情況，適用于多種形式的樣本，包括但不限于培養(yǎng)細(xì)胞和新鮮/冷凍組織。

艾美捷Epigentek-Epigenase APOBEC 3胞苷脫氨酶活性/抑制測(cè)定試劑盒（#P-3140-96）具有以下優(yōu)勢(shì)：

比色法檢測(cè)：操作步驟簡(jiǎn)單，可在4小時(shí)內(nèi)完成。  

直接測(cè)量總APOBEC3活性：通過(guò)簡(jiǎn)單檢測(cè)APOBEC3轉(zhuǎn)化的終產(chǎn)物來(lái)直接測(cè)量總APOBEC3活性。  

創(chuàng)新的試劑盒組成：背景信號(hào)極低，使檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠且一致。  

適用于細(xì)胞/組織提取物和純化APOBEC3酶：可用于檢測(cè)APOBEC3抑制劑在體內(nèi)和體外的效果。  

高靈敏度：檢測(cè)限低至10 ng純化的APOBEC3酶。  

包含C到U轉(zhuǎn)化標(biāo)準(zhǔn)品：用于定量APOBEC3的比活性。  

條板微孔板格式：支持手動(dòng)或高通量分析。

原理與流程：

在此實(shí)驗(yàn)中，底物預(yù)先涂覆在微孔板孔中。活性APOBEC3酶結(jié)合到底物上，并將胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶產(chǎn)物。APOBEC3轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物可以通過(guò)特異性探針識(shí)別。通過(guò)在微孔板光譜光度計(jì)上以450 nm波長(zhǎng)讀取吸光度，可以比色法測(cè)量與酶活性成正比的尿嘧啶產(chǎn)物的比例或量。APOBEC3酶的活性與測(cè)量到的光密度強(qiáng)度成正比。

左圖：使用APOBEC檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)生成的示例標(biāo)準(zhǔn)曲線。    

右圖：使用重組APOBEC3A實(shí)現(xiàn)的APOBEC3活性。  

使用Epigenase APOBEC3胞嘧啶脫氨酶活性/抑制檢測(cè)試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，添加了不同濃度的重組人APOBEC3A酶。

起始材料與輸入量：

每個(gè)實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞提取物量為2 ug至30 ug，最佳范圍為15-20 ug。純化酶的用量為10 ng至1 ug，具體取決于酶的類型、純度和催化活性。