MBD2是MBD蛋白家族的成員。MBD2能夠選擇性地結(jié)合甲基化DNA，并通過招募轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物來抑制甲基化靶基因的轉(zhuǎn)錄。作為一種能夠識別甲基化CpG DNA的表觀遺傳“閱讀器”蛋白，MBD2已被認(rèn)證為癌癥治療的新靶點(diǎn)。此外，一些證據(jù)也表明該蛋白與神經(jīng)發(fā)育有關(guān)。MBD2與甲基化DNA的結(jié)合活性可能會受到MBD2突變以及生化或藥理干預(yù)的影響。選擇性且強(qiáng)效的MBD2抑制可以誘導(dǎo)基因重新表達(dá)，這在癌細(xì)胞中MBD2基因破壞時已被觀察到。因此，檢測MBD2的結(jié)合活性及其抑制作用對于闡明基因激活和沉默的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制至關(guān)重要，同時也有助于癌癥和神經(jīng)疾病治療學(xué)的發(fā)展。

EpiQuik MBD2結(jié)合活性/抑制超敏檢測試劑盒是一套完整的優(yōu)化試劑，用于測量來自多種物種（包括哺乳動物、植物、真菌和細(xì)菌）的核提取物或純化MBD2蛋白的MBD2結(jié)合活性或抑制情況，適用于多種形式的樣本，包括但不限于培養(yǎng)細(xì)胞和新鮮/冷凍組織。

艾美捷Epigentek-EpiQuik MBD 2結(jié)合活性/抑制測定Ultra試劑盒（#P-3099-96）具有以下優(yōu)勢：

快速：比色法檢測可在3小時內(nèi)完成。  

直接：在有無抑制劑的情況下直接測量MBD2結(jié)合活性。  

用途廣泛：適用于細(xì)胞/組織提取物或純化的MBD2蛋白，可用于檢測TET羥化酶抑制劑在體內(nèi)和體外的效果。  

靈敏：能夠檢測低至10 ng純化MBD2蛋白的活性。  

便捷：包含MBD2蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，用于定量分析。  

靈活：采用條板微孔板格式，支持手動或高通量分析。

原理與流程：

在此實(shí)驗(yàn)中，甲基化DNA被穩(wěn)定地涂覆在微孔板孔中。活性MBD2蛋白能夠結(jié)合到甲基化DNA上。結(jié)合的MBD2蛋白可以通過特異性抗體識別。結(jié)合的MBD2-抗體復(fù)合物的信號強(qiáng)度與結(jié)合活性成正比，可以通過增強(qiáng)劑放大，并通過在微孔板光譜光度計(jì)上以450 nm波長讀取吸光度來進(jìn)行比色法測量。MBD2的結(jié)合活性與測量到的光密度強(qiáng)度成正比。

左圖：EpiQuik MBD2結(jié)合活性/抑制超敏檢測試劑盒的流程示意圖。    

右圖：使用MBD2蛋白標(biāo)準(zhǔn)生成的示例標(biāo)準(zhǔn)曲線。

起始材料與輸入量：

輸入材料可以是核提取物或純化的MBD2蛋白。每個實(shí)驗(yàn)所需的核提取物量為2 ug至20 ug，最佳范圍為5-10 ug。純化蛋白的用量為10 ng至500 ng，具體取決于蛋白的純度和催化活性。