CRISPR（成簇規(guī)律間隔短回文重復序列）和Cas9（CRISPR相關(guān)系統(tǒng)或CRISPR相關(guān)蛋白9核酸酶）的發(fā)現(xiàn)，是細菌用來抵御外來DNA的一種防御機制，已被證明是基因編輯和基因組工程應用中靶向和修改遺傳序列的無價工具。CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過將RNA引導的Cas9核酸酶和適當?shù)囊龑NA（gRNA）送入細胞，實現(xiàn)對靶向基因組位點的序列特異性切割。此外，緊隨特異性序列之后的原間隔相鄰基序（PAM）序列對于Cas9核酸酶的成功結(jié)合是必需的。監(jiān)測Cas9編輯蛋白的水平或在轉(zhuǎn)染細胞中追蹤Cas9編輯蛋白是重要且關(guān)鍵的，因為它可以告知轉(zhuǎn)染效率并優(yōu)化整個細胞群體中的編輯過程。

EpiQuik? CRISPR/Cas9檢測ELISA試劑盒（比色法）適用于使用純化的Cas9核酸酶和從各種物種的組織和培養(yǎng)細胞中分離的全細胞提取物，特異性定量測量與CRISPR相關(guān)的蛋白9（Cas9和dCas9：化膿性鏈球菌）的量。

艾美捷EpiQuik CRISPR/Cas9檢測ELISA試劑盒（比色法）（#P-4060-48）優(yōu)勢與特點：

1、快速高效的實驗流程，可在3小時內(nèi)完成。

2、創(chuàng)新的比色法高通量檢測，無需電泳即可定量測量Cas9蛋白量，特別適合篩選Cas9轉(zhuǎn)染克隆。

3、高靈敏度和特異性。檢測限低至0.1 ng/孔，在全細胞提取物中指示量范圍內(nèi)的動態(tài)范圍為0.5-20 ng/孔。僅識別化膿性鏈球菌Cas9。

4、方便地包含對照用于Cas9量的定量。

5、條帶微孔板格式使實驗靈活：可手動或高通量操作。

6、簡單、可靠且一致的實驗條件。

原理與操作流程：

本試劑盒用于測量各種細胞和組織的全細胞提取物或純化Cas9蛋白中的Cas9水平。在使用該試劑盒的實驗中，樣本中的Cas9蛋白被緊密且穩(wěn)定地固定在條帶孔上。隨后，結(jié)合的Cas9蛋白可被檢測抗體識別，并通過比色顯色試劑進行顯色。Cas9的比例與吸光強度成正比。通過與Cas9對照比較，可以定量Cas9的絕對量。

起始材料：

起始材料應為純化的Cas9核酸酶或全細胞提取物。每次實驗所需的全細胞提取物量可在0.5 ?g到5 ?g之間，最佳范圍為1到2 ug。起始材料的總體積不應超過4 ul。

文獻引用：

Rai MN et. al. (March 2025). Efficient mutagenesis and genotyping of maize inbreds using biolistics, multiplex CRISPR/Cas9 editing, and Indel-Selective PCR. Plant Methods. 21(1):43.

Sharma H et. al. (April 2023). A Scalable High-Throughput Isoelectric Fractionation Platform for Extracellular Nanocarriers: Comprehensive and Bias-Free Isolation of Ribonucleoproteins from Plasma, Urine, and Saliva. ACS Nano.

Baron et. al. (December 2021). Improved alpharetrovirus-based Gag.MS2 particles for efficient and transient delivery of CRISPR/Cas9 into target cells Molecular Therapy: Nucleic Acid.