Saphir-Bst-Turbo-GreenMaster凍干液專為等溫?cái)U(kuò)增DNA而設(shè)計(jì)。這種混合物是基于下一代基因增強(qiáng)的Bst聚合酶。該混合物是在恒定溫度（60至65°C）下超快速和穩(wěn)健擴(kuò)增DNA的理想選擇。該酶顯示出高鏈置換活性，并產(chǎn)生高達(dá)109的擴(kuò)增因子，這在PCR測定中相當(dāng)于大約.30個(gè)循環(huán)。聚合酶比Saphir-Bst聚合酶（#PCR-389/#PCR-388/#PCR-387）快2-3倍，并且允許在5-10分鐘內(nèi)檢測靶基因。

艾美捷Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉（PCR-395S）包含Saphir Bst Turbo 聚合酶、dNTPs（脫氧核苷酸三磷酸）、反應(yīng)緩沖液、綠色DNA嵌入染料、添加劑和穩(wěn)定劑。

PCR級水處理：

Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉是以8管條狀或預(yù)裝有完整母液的96孔板形式交付的，干燥、室溫下穩(wěn)定。這種凍干粉結(jié)合了高性能、使用便利性和穩(wěn)定性。無需冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟最小化了錯(cuò)誤或污染的風(fēng)險(xiǎn)。每個(gè)小瓶包含了進(jìn)行20 μl LAMP檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執(zhí)行檢測，只需向小瓶中加入引物混合物并添加DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參考染料一起使用，在與ROX信號評估兼容的PCR儀器中。在這種情況下，應(yīng)將ROX染料（#PCR-351）以1倍濃度添加到PCR反應(yīng)中。

檢測設(shè)計(jì)：

等溫?cái)U(kuò)增是一種極其敏感的檢測方法，應(yīng)注意避免設(shè)置區(qū)域和設(shè)備與之前反應(yīng)的DNA發(fā)生污染。一個(gè)可能出現(xiàn)的問題是無模板對照中發(fā)生擴(kuò)增，這可能是由于攜帶污染或非特異性退火引物或引物二聚體形成造成的。

引物設(shè)計(jì)：

通常，使用4種不同的引物來識別6個(gè)不同的DNA區(qū)域，允許特異性擴(kuò)增目標(biāo)基因。增加一對引物可以進(jìn)一步加速擴(kuò)增，將總檢測時(shí)間縮短至10-20分鐘。

手動(dòng)設(shè)計(jì)引物可能因反應(yīng)序列復(fù)雜而具有挑戰(zhàn)性。為了簡化設(shè)計(jì)過程，建議使用引物設(shè)計(jì)軟件。

由于計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)的引物的靈敏度和非模板擴(kuò)增可能會(huì)有所不同，建議在選定最終引物集之前評估2-4組真實(shí)引物集。

檢測設(shè)置：

使用帶無菌過濾頭的移液管，并在與DNA制備或分析不同的區(qū)域進(jìn)行設(shè)置。所有擴(kuò)增中都應(yīng)包括無模板對照。首先，準(zhǔn)備一個(gè)10倍濃度的引物預(yù)混液。其次，設(shè)置等溫?cái)U(kuò)增檢測：

分配母液

徹底渦旋混合引物/探針混合物以確保均勻性。向每個(gè)PCR管或板孔分配20 μl。

? 使用特定的等溫?cái)U(kuò)增檢測儀器或?qū)崟r(shí)PCR循環(huán)儀來運(yùn)行檢測。

? 將儀器設(shè)置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物退火溫度）。

? 以1分鐘的間隔測量熒光強(qiáng)度，持續(xù)Z多30分鐘。

Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉相關(guān)產(chǎn)品：

Saphir Bst Turbo Polymerase, #PCR-390

Saphir Bst Turbo GreenMaster, #PCR-393

Saphir Bst Turbo GreenMaster high ROX, #PCR-394