生成敲除和敲入細胞的過程：

PNA Bio提供經濟的細胞系生成服務（敲除和敲入），能夠及時地生成工程化細胞系。下面展示了工程化細胞系生成的過程。

設計并合成4到8個gRNA載體

通過錯配敏感核酸酶檢測選擇Z有效的工程化核酸酶

合成報告載體以富集基因編輯事件的細胞

優(yōu)化轉染方案

設計敲入項目的供體載體

通過MACS、FACS或次黃霉素抗性選擇池（選項：在選定的池中驗證效率）

單細胞克隆

使用T7E1檢測和/或F-PCR篩選克隆

通過TA克隆和測序確認純合子敲除

PNA Bio的優(yōu)勢：

多年使用ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9系統(tǒng)的經驗

內部開發(fā)的軟件，設計具有Z大活性和Z小非靶點效應的gRNA序列

健全的檢測系統(tǒng)，篩選和選擇Z優(yōu)化的工程化核酸酶

報告系統(tǒng)以富集基因編輯的細胞（比傳統(tǒng)方法提高3到20倍）

PNA Bio生成的一些敲除或敲入細胞系

常用細胞：HEK293、NIH3T3、CHO細胞

人類癌細胞：HeLa、HCT116、SKBR3、Hep3B、HepG2、MCF7、K-562、H-358細胞

小鼠細胞：Pan02、CT26WT細胞

神經細胞：Sy5y、PC12細胞

PNA Bio已經成功地在一輪中生成了高達5個拷貝的敲除克隆。

艾美捷PNA Bio-生成的敲除克隆示例：

KO克隆產生的例子：兩個KO克隆的測序分析和含有三個錯配的五個脫靶位點的T7E1分析。

PNA Bio-敲除和敲入細胞服務：

敲除細胞系服務：

提供至少兩個獨立的敲除（KO）克隆，并確認無支原體污染

時間線：4至7個月

敲入細胞系服務：

提供至少兩個獨立的克隆，并確認無支原體污染

包括供體載體的設計和合成

時間線：5至7個月

艾美捷科技是PNA Bio的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。