RNA引導(dǎo)的烯醇化酶（RGENs）是一種新的、可編程的基因組工程工具，適用于CRISPR/Cas系統(tǒng)。Cas9與兩種RNA復(fù)合時(shí)形成序列特異性內(nèi)切酶，其中一種引導(dǎo)靶選擇（crRNA），另一種是恒定成分（tracrRNA）。

RGEN識(shí)別一個(gè)長(zhǎng)度為23bp、以兩個(gè)鳥(niǎo)嘌呤（GG）結(jié)尾的靶特異性序列。這種對(duì)靶位點(diǎn)選擇的最低要求意味著RGEN可以被設(shè)計(jì)為切割基因組的任何區(qū)域（理論上每8bp）。

RGEN最近被證明支持人類細(xì)胞、斑馬魚(yú)和細(xì)菌的高效基因組工程。此外，RGEN的使用允許基因組工程過(guò)程的多路復(fù)用（例如，一次敲除細(xì)胞中的多個(gè)基因）。

RGEN還顯示出令人印象深刻的序列特異性活性。RGEN的活性和特異性與TALEN相當(dāng)。

艾美捷PNA Bio-自定義sgRNA/Cas9：

在存在或不存在Cas9質(zhì)粒的情況下，用越來(lái)越多的表達(dá)sgRNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。通過(guò)T7E1測(cè)定評(píng)估由CRISPR/Cas9復(fù)合物引起的In/del。

PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成服務(wù)：

1、IVT sgRNA合成服務(wù)（aRGEN）

包括設(shè)計(jì)、脫靶搜索和合成

提供50 ug sgRNA，凍干形式

注射/轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備就緒

瓊脂糖凝膠中確認(rèn)的質(zhì)量/數(shù)量

時(shí)間線：2周

2、sgRNA載體合成服務(wù)（dRGEN）

包括設(shè)計(jì)、脫靶搜索和合成

提供sgRNA和Cas9的表達(dá)質(zhì)粒

時(shí)間線：2周

可在CMV或EF1a啟動(dòng)子下共表達(dá)GFP/HygroR和RFP/PuroR盒的Cas9載體供選擇

3、sgRNA驗(yàn)證服務(wù)

客戶提供基因名稱、物種和項(xiàng)目目標(biāo)（KO、KI等）

包括4~8個(gè)gRNA載體的設(shè)計(jì)、脫靶搜索和合成

將CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染細(xì)胞并進(jìn)行錯(cuò)配敏感核酸酶測(cè)定以尋找最有效的核酸酶

sgRNA以表達(dá)質(zhì)粒（dRGEN）或RNA形式（aRGEN）提供

還提供了用于KO篩選的PCR引物、PCR條件和錯(cuò)配敏感核酸酶測(cè)定

時(shí)間線：3-6周

4、Cas9載體

CV01和CV11:Cas9（CMV或EF1a啟動(dòng)子）

CV02和CV12:Cas9-HygR-GFP（CMV或EF1a啟動(dòng)子）

CV03和CV13:Cas9 RFP PuroR（CMV或EF1a啟動(dòng)子）

5、引導(dǎo)核糖核酸（gRNA）設(shè)計(jì)

一般情況下，對(duì)于1bp和2bp的錯(cuò)配，找到?jīng)]有脫靶的gRNA序列，并且含有45~70%的GC。如果你不能避免偏離靶點(diǎn)，位于PAM附近的錯(cuò)配比gRNA 5'側(cè)的錯(cuò)配更可取。請(qǐng)注意，非規(guī)范PAM（-NAG，-NGA）也可以被切割。

我們開(kāi)發(fā)了gRNA工具，可輸出脫靶序列、GC含量和其他功能。您還可以使用公開(kāi)可用的工具來(lái)搜索各種選項(xiàng)。

6、eGFP對(duì)照sgRNA

經(jīng)驗(yàn)證可在體外和體內(nèi)切割eGFP

注射劑，凍干粉

也可與eGFP質(zhì)粒和Cas9蛋白一起作為體外切割測(cè)定的陽(yáng)性對(duì)照試劑

可用尺寸：20 ug或100 ug（20 ug x 5管）

目錄編號(hào)：AR04

艾美捷科技是PNA Bio的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。