膠原蛋白代謝的失調(diào)可能導(dǎo)致如纖維化（膠原蛋白過(guò)多）或骨關(guān)節(jié)炎（膠原蛋白過(guò)少）等病理狀態(tài)。因此，在許多與疾病相關(guān)的研究中，測(cè)量膠原蛋白的生成是重要的。

羥脯氨酸是一種非蛋白質(zhì)氨基酸，在哺乳動(dòng)物中出現(xiàn)在彈性蛋白和膠原蛋白中。它的存在主要限于膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)中，在那里它增加了三螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。羥脯氨酸是在翻譯后由酶脯氨酸羥化酶作用于特定的脯氨酸殘基而形成的。組織水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸可以用作膠原蛋白含量的直接測(cè)量。

QuickZyme敏感組織羥脯氨酸檢測(cè)試劑是對(duì)Prockop和Udenfriend（《分析生物化學(xué)》，1960年，1: 228-239）描述方法的改進(jìn)。該檢測(cè)測(cè)量樣本中存在的總羥脯氨酸量。如果這些羥脯氨酸是通過(guò)膠原蛋白的水解獲得的，它代表了樣本中存在的所有類(lèi)型的膠原蛋白，而不會(huì)區(qū)分膠原蛋白的類(lèi)型以及前膠原蛋白、成熟膠原蛋白和膠原蛋白降解產(chǎn)物。

該檢測(cè)簡(jiǎn)單，產(chǎn)生的色素在570納米處有z大的吸收。該檢測(cè)被開(kāi)發(fā)用于測(cè)量酸性組織和/或蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸，其方式是不需要酸解膠原蛋白后的干燥步驟，而這通常需要特殊設(shè)備。

現(xiàn)在羥脯氨酸可以很容易地在膠原蛋白水平低的小組織樣本中測(cè)定。

艾美捷QuickZyme 靈敏組織羥脯氨酸測(cè)定法用于羥脯氨酸的定量測(cè)定。QuickZyme敏感組織羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒是唯1一種基于羥脯氨酸的檢測(cè)試劑盒，它沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)，也不需要進(jìn)一步稀釋水解產(chǎn)物，可以在低羥脯氨酸濃度的小樣本中進(jìn)行測(cè)量。此外，不需要干燥水解產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)了快速（<2小時(shí)）、靈敏和簡(jiǎn)單（96孔板型）的測(cè)定。

數(shù)據(jù)分析：

有幾種選項(xiàng)可用于計(jì)算檢測(cè)樣本中羥脯氨酸濃度。建議使用一個(gè)軟件包來(lái)處理數(shù)據(jù)，該軟件包采用回歸曲線擬合程序。如果沒(méi)有可用的軟件包，可以按照以下方法手動(dòng)計(jì)算羥脯氨酸濃度。

1、計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的重復(fù)讀數(shù)的平均值，并從所有讀數(shù)中減去空白的平均值。

2、通過(guò)在y軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的平均A570（減去空白）與x軸上的羥脯氨酸含量（0-12.5-25-50-100-150-200-300微摩爾羥脯氨酸）相對(duì)應(yīng)，創(chuàng)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。在圖表上的點(diǎn)之間畫(huà)出z佳擬合的線性化曲線。使用這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線將測(cè)試樣本的A570值轉(zhuǎn)換為微摩爾羥脯氨酸。這樣就可以得到水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸濃度。如果在水解后包括了稀釋步驟，則應(yīng)將濃度乘以稀釋因子，以得到水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸濃度。根據(jù)樣本的準(zhǔn)備情況，可以計(jì)算出原始樣本中羥脯氨酸的含量。

典型的羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：

所示的數(shù)據(jù)曲線（見(jiàn)下方）僅供參考。確切的A570值可能會(huì)根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)略有不同。

相關(guān)產(chǎn)品：

Total Collagenassay

SensitiveTissue Collagen assay

Hydroxyproline assay

Soluble Collagen assay

Total Protein assay

Granzyme B activity Reagent SetHuman MMP-2 activity assayHuman MMP-7 activity assayHuman MMP-8 activityassayHuman MMP-9activityassayMouse MMP-9 activity assayHuman MMP-14 activity assayHuman TIMP-1 ELISA

Human Urokinase(uPA)ELISA

艾美捷科技是QuickZyme Biosciences的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。