QuickZyme-Hydroxyproline測定：高效生物化學(xué)分析解決方案

發(fā)布者：艾美捷科技發(fā)布時(shí)間：2024-07-12

分享到：

膠原蛋白代謝的失調(diào)可能導(dǎo)致如纖維化（膠原蛋白過多）或骨關(guān)節(jié)炎（膠原蛋白過少）等病理狀態(tài)。因此，在許多與疾病相關(guān)的研究中，測量膠原蛋白的生成是重要的。

羥脯氨酸是一種非蛋白質(zhì)氨基酸，在哺乳動物中主要出現(xiàn)在彈性蛋白和膠原蛋白中。它的存在主要限于膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)中，在那里它增加了三螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。羥脯氨酸是在翻譯后由脯氨酸羥化酶的作用從特定的脯氨酸殘基形成的。組織水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸可以用作膠原蛋白含量的直接測量。

QuickZyme羥脯氨酸檢測試劑是對Prockop和Udenfriend描述的方法（《分析生物化學(xué)》，1960年，1: 228-239）的改進(jìn)。該檢測測量樣本中存在的總羥脯氨酸量。如果這些羥脯氨酸是通過膠原蛋白的水解獲得的，它代表了樣本中存在的所有類型的膠原蛋白，而不會區(qū)分膠原蛋白的類型以及前膠原蛋白、成熟膠原蛋白和膠原蛋白降解產(chǎn)物。

該檢測簡單，產(chǎn)生的色素在570納米處有z大的吸收。該檢測被開發(fā)用于測量酸性組織和/或蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸，其方式是不需要酸解膠原蛋白后的干燥步驟，而這通常需要特殊設(shè)備。

艾美捷QuickZyme Biosciences-Hydroxyproline測定試劑盒組成：

2個(gè)粘合板封條

檢測緩沖液

2個(gè)檢測試劑A

檢測試劑B

無菌水中的羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（3 mM）

96孔檢測板

檢測協(xié)議手冊

注意事項(xiàng)：

試劑盒包含正丙醇、高氯酸和二甲基亞砜。在樣本水解和使用試劑盒過程中，請佩戴眼部、手部、面部和衣物防護(hù)裝備。在通風(fēng)柜中進(jìn)行檢測。

關(guān)鍵參數(shù)：

1、這類檢測，像許多生化檢測一樣，可能會顯示出基質(zhì)效應(yīng)：樣本中的干擾因素影響信號。通過稀釋水解產(chǎn)物可以避免這種效應(yīng)。如果首次使用某種樣本類型，應(yīng)測試不同的稀釋度，直到獲得A570與稀釋度的線性關(guān)系。通常至少需要5倍的稀釋（在100毫克組織/毫升6M鹽酸水解產(chǎn)物中）。應(yīng)用說明中給出了幾種小鼠組織的建議稀釋度（請參閱產(chǎn)品網(wǎng)頁）。

2、如果為了避免基質(zhì)效應(yīng)，特定樣本類型所需的稀釋度導(dǎo)致A570值非常低，我們建議使用QuickZyme敏感組織羥脯氨酸試劑盒。

3、檢測中使用的樣本應(yīng)存在于含有4-6M鹽酸（酸水解）或2-4M氫氧化鈉（堿水解）的溶液中。

4、在檢測的z后一步，60°C下顏色發(fā)展的孵化時(shí)間為1小時(shí)。這是基于在烘箱中的孵化。如果在板式孵化器中進(jìn)行孵化（孵化器與板之間接觸緊密），則縮短孵化時(shí)間（20-30分鐘）就足夠了。

5、當(dāng)檢測緩沖液加入35微升的水解產(chǎn)物時(shí)，可能會出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，這將在一分鐘內(nèi)消失，不會影響檢測。

6、在低溫下，檢測緩沖液中可能含有一些晶體。這些可以通過加熱輕松溶解。

7、在室溫以下，試劑A可能會變成凝膠狀或固體，加熱至37°C并渦旋混合可以解決這個(gè)問題。

典型的羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線（不減去背景）：

所示數(shù)據(jù)曲線（見下文）僅用于演示。精確的A570值在每次實(shí)驗(yàn)中可能略有不同

QuickZyme Biosciences-Hydroxyproline