Immunoscan CCPlus? 試劑盒是一種酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），用于定性和半定量測定人血清中針對環(huán)狀瓜氨酸化肽（CCP）的IgG抗體。該測定用于檢測單個血清樣本中的抗體。該測定的結果不得用于臨床診斷或患者管理。分析應由訓練有素的實驗室專業(yè)人員執(zhí)行。僅限研究使用。不得用于診斷程序。

總結和解釋

類風濕性關節(jié)炎（RA）是最常見的系統(tǒng)性自身免疫疾病之一。這種影響全球人口高達1-2%的疾病的病因尚不明確。RA的診斷主要依賴于疾病的臨床表現。目前常規(guī)使用的唯一的血清學檢測是測定血清中類風濕因子（RF）的存在。RF是針對IgG類免疫球蛋白的恒定區(qū)域的抗體。然而，這些抗體在其他自身免疫疾病、感染以及高達15%的健康個體中也存在相對較高的比例。

在RA患者的血清中也發(fā)現了更具特異性的抗體（見（1）概述）。據報道，大約50%的RA患者存在抗過核因子（APF）抗體，特異性超過70%（2）。描述了一些與角蛋白或其他已知蛋白質無關的環(huán)狀合成肽，這些肽能被RA患者血清中的自身抗體特異性識別（3）。這些肽隨后被用于EIA檢測RA特異性自身抗體（3）。臨床評估研究表明，EIA在大量明確定義的RA患者血清中呈陽性，對疾病對照具有極高的特異性（3-8）。在早期RA中，針對關節(jié)受累和放射學損傷的抗環(huán)狀瓜氨酸化肽（anti-CCP）抗體的測量發(fā)現了診斷和預后價值（7, 9-14）。在臨床癥狀發(fā)展前幾年就可以檢測到抗-CCP抗體（14）。一項前瞻性隊列研究表明，93%的抗CCP陽性的未分化關節(jié)炎患者最終發(fā)展為類風濕性關節(jié)炎，顯示了這些抗體的強大陽性預測價值（14）。

Svar Life Science的Immunoscan CCPlus?測定基于含有瓜氨酸殘基的高純度合成肽。這種抗CCP試劑盒包含了基于在檢測RA自身抗體方面更優(yōu)越的性能而選擇的改進型合成肽（8-14）。

艾美捷環(huán)瓜氨酸肽(CCP)IgG抗體檢測試劑盒（IMMUNOSCAN CCPlus）（#RA-96Plus）的測定原理：

抗CCP抗體試劑盒基于ELISA方法。測試使用的微孔板孔內涂有瓜氨酸化的合成肽（抗原）。將稀釋的血清樣本應用于孔中并孵育。如果存在特異性抗體，它們將與孔中的抗原結合。未結合的物質被洗滌掉，通過添加辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗人IgG來檢測任何結合的抗體，隨后進行第二次洗滌和與底物的孵育。反應性抗體的存在將導致顏色的發(fā)展，這與結合抗體的數量成正比，并通過光度測定法確定。

注意事項：

僅限研究使用。不得用于診斷程序。

1. 終止液含有0.5 M硫酸。不要使試劑接觸到皮膚。

2. 避免所有生物材料與皮膚和粘膜接觸。

3. 不要口吸移液。

4. 對照和校準器含有人源血清。盡管已針對HIV 1+2、HCV、HbsAg和HIV-1 Ag進行檢測并確認為陰性，但這些材料必須被視為潛在感染性物質。-疾病控制和預防中心以及國立衛(wèi)生研究院建議在生物安全二級水平處理潛在感染性因子。

5. TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）通過吸入、皮膚接觸和吞咽是有毒的。處理底物時要小心。

6. 不要使用過期的組分，不要混用不同批次的組分。

7. 每個孔最終用作光學比色皿。因此，不要觸摸孔的下表面，防止損壞和污垢。

8. 嚴格遵守本協(xié)議將獲得最佳結果。在整個過程中仔細移液和洗滌是保持精度和準確性的必要條件。

9. 對照、校準器和稀釋緩沖液含有0.09%的疊氮鈉。

10. 有報道稱疊氮鈉可能與管道中的鉛和銅反應形成爆炸性化合物。處置時，用水沖洗排水管以最小化金屬疊氮化合物的積累。

Svar Life Science可以根據要求提供產品安全數據表。

試劑盒內容：

1個密封的（96孔）涂有CCP肽的微孔板。即用型。

5瓶含有校準器（陽性人血清池）（1.2 mL）。即用型（藍色）。

1瓶含有參考對照人血清（1.2 mL）。即用型（藍色）。

1瓶含有陽性對照人血清（1.2 mL）。即用型（藍色）。

1瓶含有陰性對照人血清（1.2 mL）。即用型（藍色）。

1瓶含有結合物溶液（過氧化物酶結合到抗人IgG抗體）（15 mL）。即用型（紅色）。

1瓶含有底物溶液TMB（15 mL）。即用型。

2瓶含有稀釋緩沖液（35 mL）。即用型（藍色）。

1瓶含有終止液（15 mL）。即用型。

2瓶含有洗滌緩沖液（35 mL）20倍濃縮。

需要但未提供的物料或設備：

帶有450 nm濾光片的酶標儀。

自動微孔板洗滌器。

處理和儲存：

在+2°C至+8°C的暗處儲存試劑盒。

不要使用過期的試劑。

建議在立即使用前打開密封的微孔板。

應避免直接光照在色素溶液上。

如果觀察到第一校準器A（3200 U/mL）E450 nm <0.9的弱或缺失的顏色反應，則測試結果無效。

樣品準備：

本測試在血清樣本上進行。對于血清樣本，允許凝血完全。在4-8°C下儲存樣本最多48小時。長時間儲存時在-20°C下冷凍。稀釋樣本1:50。（將10 ?L樣本與490 ?L稀釋緩沖液混合。在測試中使用100 ?L。（見測定方案）。

試劑的準備和處理：

在開始測試之前，應將微孔板和試劑放置至室溫。在板達到室溫之前不要打開板的密封。

使用前徹底混合試劑。

試劑盒中包含的試劑足夠進行96次分析（包括校準器和對照分析）。

校準器和對照以雙份分析。

緩沖液濃縮物可能含有鹽晶體，應在室溫（18-25°C）下溶解。

1. 使用后立即將所有試劑儲存在2-8°C的暗處。

2. 涂有CCP肽的微孔板。即用型。

用帶有干燥劑的鋁箔重新密封剩余孔，并儲存在2-8°C。

3. 洗滌緩沖液（35 mL）。洗滌緩沖液提供20倍濃縮。使用前準備稀釋液。將35 mL洗滌緩沖液加入665 mL蒸餾水中并徹底混合。

4. 底物溶液TMB（15 mL）。即用型試劑。存放在暗處。

5. 稀釋緩沖液（35 mL）。即用型。

6. 結合物溶液（15 mL）。即用型。

7. 終止液（15 mL）。即用型。

8. 校準器A-E（1.2 mL）。五個稀釋的陽性人血清校準器，用相對單位表示。

校準器A含有3200 U/mL，B 800 U/mL，C 200 U/mL，

D 50 U/mL和E 25 U/mL。校準器即用型。

9. 參考對照（1.2 mL）。稀釋的人血清，25 U/mL，即用型。

10. 陰性對照（1.2 mL）。稀釋的人血清，即用型。

11. 陽性對照（1.2 mL）。稀釋的人血清，即用型。

定性協(xié)議：

從含有對照和樣本的孔的個別吸光度中減去孔A1和A2的平均吸光度值。

計算對照和每個樣本的吸光度（光密度）比率。

環(huán)瓜氨酸肽(CCP)IgG抗體檢測試劑盒（IMMUNOSCAN CCPlus）文獻參考：

1. Van Boekel, M., Vossenaar, E., Van den Hoogen, F., Van Venrooij, W.Autoantibody systems in Rheumatoid Arthritis: specificity, sensitivity and diagnostic value.Arthritis Res. 4, 87-93 (2002).

2. Nienhuis, R. & Mandema, E.A new serum factor in patients with Rheumatoid Arthritis. The anti perinuclear factor.Ann. Rheum. Dis. 23, 302-305 (1964).

3. Schellekens, G., De Jong, B., Van den Hoogen, F., Van de Putte, L.,Van Venrooij, W.,Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by Rheumatoid Arthritis-specific autoantibodies.Clin. Invest. 101, 273-281 (1998).