每天，每個細胞內的DNA都會因環(huán)境因素和正常代謝過程而發(fā)生1000至100萬次分子損傷。雖然這一數(shù)字僅占人類基因組約60億個堿基（30億個堿基對）中的極小部分，但關鍵基因上未修復的損傷會阻礙細胞正常功能的發(fā)揮，并顯著增加癌變風險。因此，準確、高效地檢測DNA損傷對于基礎研究和藥物篩選具有重要意義。

彗星檢測技術原理

彗星檢測，又稱單細胞凝膠電泳，是一種在單個細胞水平上測量DNA損傷的常用技術。在電場作用下，含有碎片和鏈斷裂的受損DNA會與完整DNA分離，在顯微鏡下呈現(xiàn)經典的“彗星拖尾”形態(tài)。DNA損傷程度通常通過彗尾長度進行視覺評估，也可借助圖像分析軟件測量多種參數(shù)。

由艾美捷代理Cell Biolabs公司推出的OxiSelect 24孔彗星檢測試劑盒（貨號：STA-835）是一種快速、靈敏的檢測方案，每套試劑盒可完成24次檢測。其基本操作流程如下：

1. 將單個細胞與熔融瓊脂糖混合后加樣至24孔彗星檢測專用玻片

2. 使用裂解緩沖液和堿性溶液處理包埋的細胞，使DNA松弛并變性

3. 在水平電泳槽中進行電泳，將完整DNA與損傷片段分離

4. 干燥后使用DNA染料染色，通過熒光顯微鏡觀察

在上述條件下，含有斷裂和鏈損傷的受損DNA比完整DNA遷移距離更長，形成典型的“彗星拖尾”形態(tài)。

試劑盒組分與儲存條件

該試劑盒在室溫下運輸，各組分及儲存要求如下：

組分名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 儲存條件

24孔彗星檢測玻片 | STA-836 | 1塊 | 室溫

彗星瓊脂糖 | 235002 | 15 mL無菌瓶 | 室溫

Vista Green DNA染料（10000×） | 235003 | 5 ?L管 | -20℃

EDTA溶液（500 mM） | 235004 | 50 mL瓶 | 室溫

10×裂解液 | 235005 | 20 mL瓶 | 室溫

用戶自備材料

進行檢測前，需準備以下材料：

NaCl粉末

NaOH顆粒

10 N NaOH（用于pH調節(jié)）

DMSO（可選）

70%乙醇

TE緩沖液（10 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）

PBS（不含Mg2+和Ca2+）及去離子水

EDTA（二鈉鹽）

操作要點提示

裂解液配制：使用前需將10×裂解液稀釋至1×工作濃度，并加入NaCl粉末至終濃度。可根據實驗需要添加DMSO。

電泳條件：堿性電泳條件下（33 V，300 mA，15分鐘）可獲得理想分離效果。以依托泊苷處理的Jurkat細胞為例，經20 ?M依托泊苷處理4小時后，可見明顯的彗星拖尾形態(tài)，而未處理細胞則保持完整核形態(tài)。

染色觀察：使用Vista Green DNA染料染色后，通過熒光顯微鏡觀察。該染料具有高靈敏度，10000×濃縮液需按推薦比例稀釋使用。

實驗示例：

圖1. 依托泊苷對Jurkat細胞的處理。在進行彗星實驗（堿性電泳條件，33 V/300 mA，持續(xù)15分鐘）前，Jurkat細胞未處理（左）或用20 ?M依托泊苷處理（右）4小時

如需高通量或其他特定應用場景，可參考以下同系列產品：

STA-321：DNA雙鏈斷裂染色試劑盒

STA-324：氧化性DNA損傷定量試劑盒（AP位點）

STA-350：彗星檢測試劑盒（3孔玻片，15次檢測）

STA-845：48孔彗星檢測試劑盒（48孔玻片，48次檢測）

STA-855：96孔彗星檢測試劑盒（96孔玻片，96次檢測）

文獻參考：

1. Ostling, O., and Johanson, K. J. (1984). Micro gel electrophoretic study of radiation induced DNAdamages in individual mammalian cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 123, 291–298.

2. Singh, N. P., McCoy, M. T., Tice, R. R., and Schneider, E. L. (1988). A simple technique forquantification of low levels of DNA damage in individual cells. Exp. Cell. Res. 175, 184–191.

3. Olive, P. L., Banath, J. P., and Durand, R. E. (1990a). Heterogeneity in radiation induced DNAdamage and repair in tumor and normal cells using the "Comet" assay. Radiat. Res. 122, 86–94.4. De Boeck, M., Touil, N., De Visscher, G., Vande, P. A., and Kirsch-Volders, M. (2000). Validationand implementation of an internal standard in Comet assay. Mutat. Res. 469, 181–197.