Testosterone ELISA Kits睪酮ELISA試劑盒測定方案及檢測原理

睪丸素，C19H28O2，（4-雄甾-17β-醇-3-酮）是一種來自雄激素群的類固醇激素，存在于哺乳動物、爬行動物、鳥類和其他脊椎動物中1,2。

在哺乳動物中，睪丸素主要在男性的睪丸和女性的卵巢中分泌，盡管腎上腺也分泌少量。它是主要的男性性激素和一種合成代謝類固醇。

在男性中，睪丸素在男性生殖組織如睪丸和前列腺的發展中起著關鍵作用，同時促進次要性征的發展，如增加肌肉、骨骼質量以及體毛的生長3。在沒有睪丸素刺激的情況下，精子發生不會超過減數分裂階段。此外，睪丸素對于健康和幸福4以及預防骨質疏松癥5至關重要。平均而言，成年男性人體產生的睪丸素大約是成年女性人體的十倍，但女性對這種激素更敏感6。睪丸素在血糖穩態和脂質代謝中扮演著重要角色。代謝綜合征是一系列傾向于2型糖尿病、動脈粥樣硬化和心血管發病率及死亡率的風險因素的聚集。綜合征的主要組成部分是內臟肥胖、胰島素抵抗、葡萄糖不耐受、血壓升高和血脂異常（甘油三酯升高、高密度脂蛋白膽固醇水平低），以及促炎癥和促血栓狀態。橫斷面流行病學研究報告了血漿睪丸素與胰島素敏感性之間的直接相關性，低睪丸素水平與2型糖尿病風險增加相關，這在前列腺癌男性的雄激素剝奪治療中得到了生動的說明。

大多數脊椎動物中都存在睪丸素。魚類產生一種略有不同的形式，稱為11-酮睪丸素7。其在昆蟲中的對應物是蛻皮激素8。這些普遍存在的類固醇表明性激素具有古老的進化歷史9。

1. Cox, R. M., & John-Adler, H. B. (2005). Testosterone has opposite effects on male growth in lizards (Sceloporus spp.) with opposite patterns of sexual size dimorphism. Journal of Experimental Biology, 208(24), 4679–4687.

2. Reed, W. L., et al. (2006). Physiological effects on demography: a long-term experimental study of testosterone’s effects on fitness. The American Naturalist, 167(5), 667–683.

3. Mooradian, A. D., et al. (1987). Biological actions of androgens. Endocrine reviews, 8(1), 1–28.

4. Bassil, N., et al. (2009). The benefits and risks of testosterone replacement therapy: a review. Therapeutics and clinical risk management, 5, 427–448.

5. Tuck, S. P., & Francis, R. M. (2009). Testosterone, bone and osteoporosis. In T. H. Jones (Ed.). Advances in the management of testosterone deficiency (vol. 37, 123–132). Sheffield, GB: Karger Publishers.

6. Dabbs, M., & Dabbs, J. M. (2000). Heroes, rogues, and lovers: Testosterone and behavior. New York, NY:McGraw-Hill.

7. Nelson, R. J. (2005). An introduction to behavioral endocrinology (3rd ed.). Sunderland, MA: Sinauer Associates.

8. De Loof, A. (2006) Ecdysteroids: The overlooked sex steroids of insects? Males: The black box. Insect Science,13(5), 325–338.

9. Mechoulam, R., et al. (1984). Estrogens in insects. Experientia, 40, 942–944.

檢測原理：

艾美捷Testosterone ELISA Kits睪酮ELISA試劑盒（#K032-H1）使用特定生成的抗體來測量尿液和糞便樣本中，或在提取的血清和血漿中的睪丸素及其代謝物。該試劑盒不推薦用于未經提取的血清、血漿或唾液樣本。試劑盒能夠定量測量在重組緩沖液樣本和組織培養基樣本中存在的睪丸素。請在進行此測定之前閱讀完整的試劑盒說明書。提供了睪丸素標準品以生成測定的標準曲線，所有樣本均應從標準曲線上讀取。標準品或稀釋樣本被移液到一個涂有捕獲兔抗體的清晰微孔板中。向孔中的標準品和樣本中添加睪丸素過氧化物酶綴合物。通過向每個孔中添加多克隆抗體來啟動結合反應。經過2小時孵化后，對板進行洗滌并添加底物。底物與結合的睪丸素-過氧化物酶綴合物反應。經過短暫的孵化后，反應被終止，生成的顏色強度在能夠測量450納米波長的微孔板讀數器中被檢測。在對樣本稀釋進行適當校正后，使用大多數板讀數器提供的軟件計算樣本中睪丸素的濃度。

Testosterone ELISA Kits睪酮ELISA試劑盒組件：

涂覆式透明96孔板

涂有山羊抗兔IgG的透明塑料微孔板。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，1或5個，每個產品編號 X016-1EA，1 x 8條孔板

睪丸素標準品

200,000 pg/mL的睪丸素在特殊穩定溶液中。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，70 ?L 或 350 ?L，產品編號 C113-70UL 或 -350UL

DetectX?睪丸素抗體

一種特異于睪丸素的兔多克隆抗體。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，產品編號 C111-3ML 或 -13ML

DetectX?睪丸素綴合物 必須儲存在 ≤ -20°C。

一種在特殊穩定溶液中的睪丸素-過氧化物酶綴合物。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，產品編號 C315-3ML 或 -13ML

測定緩沖液濃縮液

需要用去離子水或蒸餾水稀釋的5倍濃縮液。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，28 mL 或 55 mL，產品編號 X065-28ML 或 -55ML

洗滌緩沖液濃縮液

需要用去離子水或蒸餾水稀釋的20倍濃縮液。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，30 mL 或 125 mL，產品編號 X007-30ML 或 -125ML

TMB底物

試劑盒 K032-H1 或 -H5，11 mL 或 55 mL，產品編號 X019-11ML 或 -55ML

停止溶液

1M的鹽酸溶液。腐蝕性。

試劑盒 K032-H1 或 -H5，5 mL 或 25 mL，產品編號 X020-5ML 或 -25ML

板封口膜

試劑盒 K032-H1 或 -H5，1或5個，產品編號 X002-1EA

測定方案：

建議所有標準品和樣本都進行雙重測定，以使最終用戶能夠準確確定睪丸素濃度。

1. 使用背面的板布局表以幫助正確識別樣本和標準品。

2. 確定要使用的孔數，并將未使用的孔放回帶有干燥劑的鋁箔袋中。密封Ziploc板袋并儲存在4?C。

將標準品或樣本沿板條列（A至H）逐滴加入孔中，以最大限度地利用條孔。

3. 向板中的孔中加入50 ?L的樣本或標準品。

4. 向非特異性結合（NSB）孔中加入75 ?L的1X測定緩沖液。

5. 向最大結合（B0或零標準）孔中加入50 ?L的1X測定緩沖液。

6. 使用重復移液管向每個孔中加入25 ?L的DetectX?睪丸素綴合物。

7. 除了NSB孔外，使用重復移液管向每個孔中加入25 ?L的DetectX?睪丸素抗體。

8. 輕輕拍打板的側面以確保試劑充分混合。用板封口膜覆蓋板并在室溫下搖動2小時。我們建議搖動速度在700-900轉/分鐘左右。如果不搖動板，結合的信號將大約低20%。

9. 抽吸板并在干凈的吸收毛巾上輕拍以擦干。

10. 使用重復移液管向每個孔中加入100 ?L的TMB底物。

11. 在室溫下孵育板30分鐘，不要搖動。

12. 使用重復移液管向每個孔中加入50 ?L的停止溶液。

13. 在能夠讀取450納米波長的板讀數器中讀取每個孔產生的光密度。

14. 使用板讀數器內置的4PLC軟件功能計算每個樣本的睪丸素濃度。

注意：如果您只使用部分條孔板，在測定結束時丟棄已使用的孔，并保留板框架以用于剩余未使用的孔。

典型標準曲線：

始終運行自己的標準曲線來計算結果。請勿使用此數據