VitroGel STEM與大多數(shù)hPSC培養(yǎng)基和組織培養(yǎng)器皿兼容。由于D特的靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方案，在大型生物反應(yīng)器中使用時(shí)不需要微載體，從而使細(xì)胞收獲更加簡(jiǎn)單和高效。使用VitroGel STEM 培養(yǎng)的 3D hPSCs細(xì)胞團(tuán)可用于進(jìn)一步的傳代培養(yǎng)、分化或重新建立 2D 培養(yǎng)形態(tài)。

艾美捷VitroGel STEM 參數(shù)：

貨號(hào)：VHM02

配方：無異種成分，功能性水凝膠

用途：用于人類多能干細(xì)胞的三維靜態(tài)懸浮培養(yǎng)

操作：室溫下即用型

細(xì)胞收獲：VitroGel組織球回收溶液

5-15分鐘細(xì)胞恢復(fù)

pH值：中性

儲(chǔ)存：在2-8°C下儲(chǔ)存，常溫運(yùn)輸

規(guī)格：10毫升和2毫升

初始靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方案：

推薦的材料和試劑

VitroGel STEM

hPSCs培養(yǎng)基（mTeSR-PLUS、StemFlex、mTeSR-1、Essential 8、NutriStem hPSC 等）

Y-27632 （10 mM/mL）

VitroGel Cell Recovery Solution（cat#MS03-100）（可選）

40、70 或 100 μm 可逆過濾器 （可選）

細(xì)胞消化液 （可選）

錐形離心管 （15 mL 或 50 mL）

血清移液器

細(xì)胞培養(yǎng)器皿（孔板、T培養(yǎng)瓶、錐形培養(yǎng)瓶）

注意：VitroGel STEM與各種培養(yǎng)器皿兼容，在靜態(tài)懸浮培養(yǎng)中培養(yǎng)hPSCs。根據(jù)所需的培養(yǎng)規(guī)模和每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的可用系統(tǒng)，可能需要針對(duì)單獨(dú)的細(xì)胞類型優(yōu)化培養(yǎng)體積。

設(shè)備：

生物安全柜（ II類）

CO2 培養(yǎng)箱（37℃、5% CO2 和 95% 濕度）

離心機(jī)

移液器

定軌搖床、旋轉(zhuǎn)瓶或生物反應(yīng)器，低速 10-40 rpm （可選）

VitroGel STEM的培養(yǎng)周期：

①7 天培養(yǎng)周期，第 3/4 天增加培養(yǎng)基

②3 天/4 天培養(yǎng)周期，無需額外培養(yǎng)基

操作指南：

1.從 2D包被凝膠表面收獲的hPSC; 或直接使用液氮凍存的細(xì)胞。（離心得到細(xì)胞沉淀以除去細(xì)胞消化液或細(xì)胞冷凍液）。

2.在含有10μm/mL Y-27632的hPSCs培養(yǎng)基中制備細(xì)胞懸液。建議細(xì)胞密度為0.2-5×106個(gè)/ mL，用于水凝膠懸浮培養(yǎng)的最終細(xì)胞密度約為0.1-5×105個(gè)/ mL。

如果需要，可通過小心地上下吸取懸浮液，將細(xì)胞團(tuán)打散到30-70μm的大小。不建議使用單細(xì)胞懸液。

根據(jù)所需的培養(yǎng)條件和hPSCs細(xì)胞團(tuán)的最終尺寸，應(yīng)針對(duì)單獨(dú)的細(xì)胞類型優(yōu)化細(xì)胞接種密度。

3.以2：1的體積比例輕輕地將VitroGel STEM與細(xì)胞團(tuán)懸液混合（例如，將2mL的VitroGel STEM與1mL的 細(xì)胞團(tuán)懸液混合。

4.以5：1的體積比例將hPSCs培養(yǎng)基（可選：10μm/mL Y-27632）添加到細(xì)胞-水凝膠混合物中（例如，將15 mL hPSCs培養(yǎng)基與3 mL細(xì)胞-水凝膠混合物混合）。小心地上下吸取，使培養(yǎng)基和混合物均勻混合。

hPSCs培養(yǎng)基和細(xì)胞-水凝膠混合物的混合體積比例可以在1：1至20：1之間調(diào)節(jié)，具體取決于最終混合物所需粘度和培養(yǎng)條件。如果混合體積比高于 5：1，則可能需要定軌搖床或旋轉(zhuǎn)瓶，并將其設(shè)置為10-40rpm的速度以維持細(xì)胞懸液。

5.將所需體積的混合物加入培養(yǎng)器皿中，并在含有5% CO2的37℃環(huán)境中孵育。

7天的培養(yǎng)周期添加額外的培養(yǎng)基：在第3天或第4天，將所需體積的hPSCs培養(yǎng)基（不含Y-27632）直接加入培養(yǎng)皿中。

注意：

選擇3天/4天培養(yǎng)周期或7天培養(yǎng)周期取決于hPSCs細(xì)胞團(tuán)的接種密度和所需條件。對(duì)于高細(xì)胞接種密度，3天/4天周期可以培養(yǎng)出100-200μm大小的細(xì)胞團(tuán)。

每當(dāng)培養(yǎng)基顏色開始變黃時(shí)，需要添加一個(gè)培養(yǎng)周期所需的額外培養(yǎng)基。（當(dāng)水凝膠懸液中的初始細(xì)胞接種密度高于1×105個(gè)/ mL時(shí)，可能需要添加3天或4天的培養(yǎng)周期額外的細(xì)胞培養(yǎng)基。

如果在培養(yǎng)周期內(nèi)加入額外的培養(yǎng)基超過一次，則可能需要定軌搖床10-40rpm以維持細(xì)胞懸液。