AGP是一種急性期蛋白，由于損傷、感染或疾病而在血清中升高。在生命診斷公司進(jìn)行的研究。已經(jīng)證明注射脂多糖后BALB/c小鼠的AGP增加了十倍（下圖）。

艾美捷Life Diagnostics小鼠a-1-酸性糖蛋白（a-1-AGP）ELISA試劑盒檢測原理：

該檢測使用親和純化的小鼠AGP抗體進(jìn)行固相（微量滴定孔）固定，并使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的小鼠AGP抗體進(jìn)行檢測。將標(biāo)準(zhǔn)樣品和稀釋樣品在微量滴定孔中孵育45分鐘。隨后對(duì)井進(jìn)行沖洗。加入HRP綴合物并孵育45分鐘。這導(dǎo)致AGP分子夾在固定抗體和檢測抗體之間。然后洗滌孔以除去未結(jié)合的HRP綴合物，并加入TMB并孵育20分鐘。如果存在AGP，則會(huì)顯示藍(lán)色。通過添加Stop溶液，將顏色更改為黃色，可以停止顯色。在450 nm處測量吸光度。AGP的濃度與吸光度成正比，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出。

Life Diagnostics小鼠a-1-酸性糖蛋白（a-1-AGP）ELISA試劑盒（#AGP-1）材料和組分：

試劑盒提供的材料：

帶有AGP抗體涂層的96孔板（12條8孔條）

辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合物，11毫升

AGP庫存（凍干）

20倍洗滌溶液：TBS50-20，50毫升

10倍稀釋液：YD25-10，25毫升

四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：TMB11-1，11毫升

終止溶液：SS11-1，11毫升

未提供但必需的材料：

移液管和吸頭

蒸餾水或去離子水

聚丙烯或玻璃試管

渦旋混合器

吸水紙或紙巾

板式孵育器/振蕩器

板式洗滌器

能夠測量450納米吸光度的板式閱讀器

曲線擬合軟件

儲(chǔ)存：

未開封的試劑盒應(yīng)存放在4°C下，微孔板應(yīng)存放在密封袋中，并放入干燥劑。試劑盒自購買之日起六個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。

一般說明：

1. 使用前應(yīng)讓所有試劑達(dá)到室溫。

2. 當(dāng)對(duì)說明有完整理解并遵守良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范時(shí)，將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果。

3. 洗滌程序至關(guān)重要。洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致精度差和吸光度讀數(shù)虛高。

4. 實(shí)驗(yàn)室溫度會(huì)影響吸光度讀數(shù)。我們的ELISA試劑盒使用設(shè)置在150轉(zhuǎn)/分鐘和25°C的搖動(dòng)孵育器進(jìn)行校準(zhǔn)。在較低溫度下進(jìn)行測定將導(dǎo)致吸光度值降低。

稀釋液配制：

稀釋液作為10倍濃縮液提供。使用前估計(jì)您測定所需的Z終稀釋液體積，并用蒸餾水或去離子水將10倍濃縮液與九倍體積的水混合稀釋。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：

1. 鼠源AGP庫存品為凍干狀態(tài)。根據(jù)瓶簽上指示的體積加入蒸餾水或去離子水，并輕輕混合直至溶解（重構(gòu)后的標(biāo)準(zhǔn)品在4°C下至少穩(wěn)定10天，但如果打算在此時(shí)間之后使用，應(yīng)在重構(gòu)后分裝并存放在-20°C下冷凍）。

2. 標(biāo)記7個(gè)聚丙烯或玻璃試管，分別為300、150、75、37.5、18.8、9.4和4.7 ng/ml。

3. 在標(biāo)記為300 ng/ml的試管中，根據(jù)庫存品瓶簽上詳細(xì)說明準(zhǔn)備300 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品。

4. 在標(biāo)記為150、75、37.5、18.8、9.4和4.7 ng/ml的試管中分別加入250 ?l稀釋液。

5. 通過在標(biāo)記為150 ng/ml的試管中混合250 ?l的300 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品和250 ?l稀釋液，準(zhǔn)備150 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品。

6. 同樣地，通過二倍系列稀釋法準(zhǔn)備剩余的標(biāo)準(zhǔn)品。

樣品準(zhǔn)備：

我們發(fā)現(xiàn)在BALB/c小鼠血清中AGP的濃度為0.16至1.4 mg/ml。為了獲得在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的值，我們建議Z初使用以下程序?qū)γ總€(gè)待測樣品進(jìn)行15,000倍稀釋：

1. 分別向不同的試管中加入998 ?l和290 ?l的1倍稀釋液。

2. 將2 ?l的血清/血漿樣品吸入含有998 ?l稀釋液的試管中并混合。這提供了一個(gè)500倍稀釋的樣品。

3. 將10 ?l的500倍稀釋樣品與第二試管中的290 ?l稀釋液混合。這提供了樣品的15,000倍稀釋。

AGP水平可能因小鼠品系、動(dòng)物飼養(yǎng)和研究方案的不同而有所變化。因此，請(qǐng)注意，應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)確定Z佳的血清或血漿稀釋比例。

艾美捷科技是Life Diagnostics的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。