什么情況下會選擇標(biāo)簽抗體用于免疫沉淀呢？

       當(dāng)某些目標(biāo)蛋白沒有對應(yīng)的特異性抗體（eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識別處于天然構(gòu)象的蛋白）而無法進(jìn)行免疫沉淀時，可以采用一個表位標(biāo)記蛋白后，再選擇針對此表位的標(biāo)簽抗體來進(jìn)行免疫沉淀。

        什么樣的標(biāo)簽適合用于免疫沉淀呢？

       Flag（DDDDK）標(biāo)簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標(biāo)簽只有8個氨基酸組成，因此它不會占據(jù)其他表位與結(jié)合域，避免導(dǎo)致融合蛋白的功能、分泌性以及轉(zhuǎn)運發(fā)生改變。由于它的親水性特點，F(xiàn)lag標(biāo)簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結(jié)合以及被腸激酶酶解。  Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是已被公認(rèn)的用于表達(dá)、純化以及檢測融合蛋白的表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于Western blotting、免疫細(xì)胞組化、免疫共沉淀、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領(lǐng)域。

       為什么推薦使用Flag標(biāo)簽抗體偶聯(lián)的瓊脂糖/磁珠？

        與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的步驟。偶聯(lián)抗體直接和目標(biāo)蛋白結(jié)合后，通過離心或使用磁力架，將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結(jié)合，降低背景。表位標(biāo)記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細(xì)胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標(biāo)記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。   

•        看到這里，您肯定會問，Protein A/G的缺點是什么？

1.        耗時：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作

2.        效果差：當(dāng)抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時，ProteinA/G和抗體結(jié)合能力弱

3.        背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結(jié)合，產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致高背景

       這就是艾美捷科技為您推薦瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體的原因：   

       瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體，優(yōu)勢更加突出：  

•        高特異性—高特異性單克隆標(biāo)簽抗體可實現(xiàn)高產(chǎn)量和高純度免疫沉淀

•        低背景—穩(wěn)定、預(yù)封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結(jié)合

•        規(guī)格靈活：100ul, 400ul, 2ml，多規(guī)格可供選擇。滿足不同規(guī)模的免疫沉淀需求

•        操作方便—產(chǎn)品說明書提供了免疫沉淀優(yōu)化方案，一次免疫沉淀時間約1 - 2小時

•        兼容性強—填料可以兼容手動及自動化操作

       瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體使用說明：

•        瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質(zhì)相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時候，傳統(tǒng)的瓊脂糖微球偶聯(lián)抗體是IP實驗的完美選擇。（瓊脂糖：每個樣品加入20ul懸液）

•        在IP實驗中，由于所有的相互作用均發(fā)生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復(fù)性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌，且孵育時間短，在日常小規(guī)模、快速處理多個樣品的IP實驗時，磁珠偶聯(lián)抗體更簡單、更快速。（磁珠：每個樣品加入10-20ul懸液）

•        提供形式：液體（抗體-瓊脂糖/磁珠復(fù)合物：保護(hù)液=1:1，50%的懸浮液）

•        儲存方式：4°C可保存一年，瓊脂糖偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和渦旋；磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和離心

       瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體說明書：

       瓊脂糖偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體：https://www.abbkine.com/datasheet/A02010AGB.pdf  

       磁珠偶聯(lián)Flag標(biāo)簽抗體：https://www.abbkine.com/datasheet/A02010MGB.pdf

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